122-16-7/磺胺硝苯的含量測(cè)定方法

背景及概述^[1]

磺胺硝苯是一種磺胺類化合物。磺胺類化合物是一類極其重要的化合物，尤其是在天然產(chǎn)物、藥物分子中被廣泛應(yīng)用。為保障食用者的安全我國(guó)及歐盟規(guī)定肉類食品中的磺胺類藥物的最高殘留限量（maximum residue limit，MRL） 為：?jiǎn)我换前奉愃幬?5.0 μg/kg， 磺胺類藥物總量100.0 μg/kg。

制備^[1]

向反應(yīng)管中加入對(duì)二硝基苯(0.2mmol)，焦亞硫酸鈉(0.6mmol，3.0equiv)，4-乙酰胺基苯硼酸(0.3mmol，1.5equiv)，氯化膽堿(0.2mmol，1.0equiv)，磷酸鋰(0.4mmol，2.0equiv),抽空換氮三次后加溶劑DMF(2.0mL)，反應(yīng)體系加熱至130℃反應(yīng)10小時(shí)。至硝基化物全部轉(zhuǎn)化完全后，將反應(yīng)體系冷卻至室溫，加水淬滅，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，柱層析分離得到純化的目的產(chǎn)物磺胺硝苯(50％)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.19(s,1H),10.36(s,1H),8.16–8.09(m,2H),7.84–7.77(m,2H),7.78–7.72(m,2H),7.33–7.24(m,2H),2.05(s,3H).；¹³CNMR(100MHz,d6-DMSO)δ168.6,143.8,143.2,141.9,131.8,127.6,124.9,118.3,117.3,23.6.

含量測(cè)定^[2]

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜負(fù)離子模式測(cè)定雞肉中磺胺硝苯的殘留，方法如下：

1.材料與試劑

雞肉樣品購(gòu)于淮安蘇果超市。磺胺硝苯（純度為98%）德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙酸乙酯均為色譜純美國(guó)默克公司；正己烷、甲酸均為色譜純美國(guó)天地公司；無(wú)水硫酸鈉為分析純南京化學(xué)試劑有限公司；水為超純水。

2.儀器與設(shè)備

TSQQuantumUltraEMR串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有電噴霧離子（electrosprayionization，ESI）源）、Surveyor液相色譜系統(tǒng)（包括自動(dòng)進(jìn)樣器Autosampler1.3）、MSPump2.0質(zhì)譜泵美國(guó)ThermoFisher公司；ZORBAXSB-C18色譜柱美國(guó)Agilent公司；氮吹儀美國(guó)Organomation公司；超純水器美國(guó)Millipore公司；離心機(jī)美國(guó)Sigma公司；超聲波清洗儀寧波新芝生物科技公司。

3.方法

3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取磺胺硝苯標(biāo)準(zhǔn)品10.00mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配成1.0g/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于冰箱中冷凍避光保存，實(shí)驗(yàn)中根據(jù)需要用甲醇稀釋至適當(dāng)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

3.2樣品提取

準(zhǔn)確稱?。?.00±0.05）g樣品于50mL離心管中，加入10mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V），于渦旋混合器上混勻1min，超聲波提取10min；以8000r/min的速率離心3min，轉(zhuǎn)移上層有機(jī)溶液至20mL氮吹管中；再用8mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V）重復(fù)提取殘?jiān)?次，合并2次提取液于氮吹管中，于45℃水浴中氮吹至干，用1.0mL甲醇-水（2∶8，V/V）溶解，加入1.0mL正己烷溶液，渦旋混勻，10000r/min離心3min，下層溶液經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶中，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。

3.3HPLC-MS/MS條件

HPLC條件：AgilentZORBAXSB-C18色譜柱（150mm×2.1mm，3.5µm）；進(jìn)樣量：25μL；柱溫：30℃；流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨，B為甲醇；梯度洗脫條件：0～4min70%A；4.1～6.5min20%A；6.6～8.5min70%A；流速：250μL/min。MS/MS條件：采用ESI源；負(fù)離子方式掃描；噴霧電壓：2500V；離子源溫度：400℃；鞘氣：40bar，

輔助氣：15bar；毛細(xì)管溫度：350℃；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiplereaction monitoring，MRM）方式檢測(cè)；優(yōu)化質(zhì)譜條件見(jiàn)表1。

參考文獻(xiàn)

[1][中國(guó)發(fā)明]CN202010157997.7磺胺類化合物及其無(wú)金屬催化的構(gòu)建方法和應(yīng)用

[2]魏云計(jì),朱臻怡,馮民,王小晉,何健,張伶俐,魏斌,丁濤.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜負(fù)離子模式測(cè)定雞肉中磺胺硝苯的殘留[J].肉類研究,2016,30(08):35-38.