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膦酰二肽鈉是1972年首先由日本科學(xué)家Umezawa等從鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離得到的一種含磷的天然糖肽類化合物。目前，膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）作為常規(guī)的生物試劑，每年有大量的市場需求。但是該化合物依賴生物提取，需要大量從美國和日本進口，價格相當(dāng)昂貴。由此可見，利用化學(xué)方法大量、高效的合成高純度的該天然產(chǎn)物在實際應(yīng)用方面都有著重要的意義。從膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）發(fā)現(xiàn)至今的近三十年時間里，有關(guān)該化合物化學(xué)合成方法的報道非常有限，而且產(chǎn)率非常低。
膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）能夠在嗜熱菌蛋白酶（Thermolysin）的活性位點形成非常強的鍵合，對嗜熱菌蛋白酶有非常強的抑制作用。嗜熱菌蛋白酶及其家族金屬蛋白酶（Thermolysin-likeproteinases，TLPs）具有良好的熱穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)切割活性，廣泛的應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細胞工程等眾多生物和醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）是從鏈霉素培養(yǎng)液中分離得到的一種含磷的天然糖肽類化合物。該化合物作為嗜熱菌蛋白酶與內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶等金屬蛋白酶的抑制劑在生物醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域里有著廣泛應(yīng)用，是一種重要的生化試劑。例如，嗜熱菌蛋白酶被用來進行蛋白質(zhì)序列分析、蛋白質(zhì)純化、細胞外組織解離、肽鍵逆向合成、生物催化轉(zhuǎn)化等等。因此，作為與嗜熱菌蛋白酶配合使用的強力抑制劑，膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）在這些領(lǐng)域亦有著廣泛的應(yīng)用。
一種通過氫亞磷酸二酯中間體合成膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）的方法，包括以下步驟：
步驟1：O-芐基-O-(α-L-2，3，4-三乙?；?-L-鼠李糖-1-亞磷酰二異丙胺4的合成：將580mg（2.0mmol，1.0當(dāng)量）2，3，4-三乙酰-α-L-鼠李糖2和0.51ml（3.4mmol，1.7當(dāng)量）干燥DBU溶于10ml干燥的乙醚中，在冰浴條件下逐滴加入溶有820mg（3.0mmol，1.5當(dāng)量）芐氧基二異丙基氨基亞磷酰氯3的乙醚溶液5ml。體系逐漸有白色沉淀析出，滴加完畢后繼續(xù)反應(yīng)30分鐘。減壓濃縮反應(yīng)液，殘余物用乙腈（5ml）減壓共沸兩次。殘余物溶于乙酸乙酯（5ml），濾除不溶物。濾液濃縮得淡黃色油狀亞磷酰胺中間體4粗品，不需進一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。
步驟2：O-芐基-O-(α-2，3，4-三乙?；?-L-鼠李糖-1-氫亞磷酸二酯5的合成：向亞磷酰胺中間體4粗品的乙腈溶液（10ml）中加入1H-四氮唑280mg（4.0mmol，2.0當(dāng)量）和水72μL（4mmol，2.0當(dāng)量）。室溫攪拌30分鐘后，減壓濃縮反應(yīng)液。殘余物溶于50ml二氯甲烷，依次用2%的稀鹽酸和水各30ml洗滌。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮至干得到淡黃色油狀氫亞磷酸二酯中間體5粗品625mg，不需進一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。
步驟3：N-(O-芐基-O-(α-2，3，4-三乙酰基-L-鼠李糖-1-)磷酰)-L-亮-L-色二肽芐酯7的合成：向溶有326mg（0.8mmol，0.8當(dāng)量）L-亮-L-色二肽芐酯6的5ml乙腈溶液中加入0.21ml（158mg，1.5mmol，1.5當(dāng)量）三乙胺，0.48ml（769mg，5.0mmol，5.0當(dāng)量）四氯化碳。將444mg（1.0mmol，1.0當(dāng)量）的氫亞磷酸二酯中間體5粗品溶于5ml的乙腈中，在冰浴的條件下，逐滴加入反應(yīng)瓶中。滴加完畢，繼續(xù)反應(yīng)30分鐘。減壓濃縮反應(yīng)液。殘余物溶于乙酸乙酯（5ml），濾除不溶物。濾液濃縮得淡黃色油狀膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）前體7粗品。硅膠柱層析分離（石油醚：乙酸乙酯：2：1至1：1），得無色油狀的膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）前體7純品517mg，產(chǎn)率：76%。
步驟4：N-(O-α-L-鼠李糖-1-)磷酰)-L-亮-L-色二肽二鈉鹽（膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉））1的合成：向溶有85mg（0.1mmol，1當(dāng)量）前體7的20ml無水甲醇中加入（10%底物質(zhì)量）9mg5%鈀碳后，向體系通入氫氣在常壓下進行氫化。室溫攪拌1小時后，向反應(yīng)中逐滴加入（2.0當(dāng)量，0.1M）的甲醇鈉甲醇溶液，中和至pH=7。中和完畢后，再緩慢逐滴加入（3.0當(dāng)量，0.1M）甲醇鈉甲醇溶液。室溫攪拌2小時后，用（3.0當(dāng)量，0.1M）的鹽酸甲醇溶液中和至pH=7。過濾除去鈀碳，減壓濃縮反應(yīng)液，殘留物真空干燥，得到58mg白色粉末狀粗品。經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20層析純化（洗脫劑：甲醇），得55mg的白色粉末狀膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）1純品，產(chǎn)率：94%，熔點：176-179℃。
[1] CN201310204733.2通過氫亞磷酸二酯中間體合成膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）的方法
[2] 一種通過氫亞磷酸單酯中間體合成膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）的新方法