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118-00-3/鳥嘌呤核苷

背景及概述[1][3]

核甘是一類糖苷的總稱。核苷是核酸和核苷酸的組成成分。核苷都是由D-核糖或D-Z-脫氧核糖與嘧啶堿或嘌呤堿縮合而成。核苷一般為無色結(jié)晶,不溶于普通有機溶劑,易溶于熱水,熔點為160~240℃。由D-核糖生成的核苷稱核糖核苷,參與RNA組成,由D-α-脫氧核糖生成的核苷稱脫氧核糖核苷,參與DNA組成。

D-核糖與腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶縮合生成相應(yīng)的腺嘌呤核糖核苷、鳥嘌呤核糖核苷、胞嘧啶核糖核苷、胸腺嘧啶核糖核苷和尿嘧啶核糖核苷,它們分別簡稱為腺苷(A)、鳥苷(G)、胞苷(C)、胸苷(T)和尿苷(U)。同樣,D-2-脫氧核糖與腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶分別縮合可生成脫氧腺苷(aA)、脫氧鳥苷(aG)脫氧胞苷(aC)、和脫氧胸苷。

上述所有核苷都屬于N-糖苷,其中的D-核糖和D-2-脫氧核糖都以β-呋喃糖形式存在,故它們對堿都很穩(wěn)定;嘌呤類核苷易被酸水解,而嘧啶類核苷則不易,僅在濃酸長時間加熱處理才水解。此外還有一些稀有核苷,如2′-O-甲基核糖核苷(Nm),包括2′-O-甲基核糖腺苷(Am)、2′-O-甲基核糖鳥苷(Gm)2′-O-甲基核糖胞苷(Cm)、2′-O-甲基核糖尿苷(Um)和2′-O-甲基核糖假尿苷等,是多種tRNA和真細胞mRNA的組成成分。

結(jié)構(gòu)

鳥嘌呤核苷

應(yīng)用[2]

鳥嘌呤核苷(Guanosine)是核苷的一種,是由鳥嘌呤與核糖(呋喃核糖)環(huán)組成,兩者之間由β-N9-配糖鍵相連。鳥苷經(jīng)過磷酸化之后可變成鳥苷單磷酸(GMP)、環(huán)鳥苷單磷酸(cGMP)、鳥苷雙磷酸(GDP)或鳥苷三磷酸(GTP)。 若鳥苷與脫氧核糖相連,則會產(chǎn)生脫氧鳥苷。鳥嘌呤核苷是食品和醫(yī)藥產(chǎn)品的重要中間體。鳥嘌呤核苷的用途十分廣泛,是食品和醫(yī)藥產(chǎn)品的重要中間體。

在醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域,鳥嘌呤核苷主要是作為合成利巴韋林、阿昔洛韋等核苷類抗病毒藥物的重要中間體,也是用于制造無環(huán)鳥嘌呤核苷(Acyclovir)、三氮唑核苷(ATC)、三磷酸鳥嘌呤核苷鈉(GTP)、抗癌藥物氟鐵龍(5-氟脫氧尿苷)等藥物的主要原料;在食品工業(yè)領(lǐng)域,鳥嘌呤核苷是作為呈味核苷酸鳥嘌呤核苷酸二鈉的主要原料,與肌苷酸二鈉混合簡稱I+G,添加到味精中即是第二代、第三代味精,具有十分廣闊的市場。目前,鳥嘌呤核苷需求量以每年10%-20%的速度增加。

制備[4]

鳥嘌呤核苷的生產(chǎn)方法有化學合成法、菌體自溶法、發(fā)酵法。由于化學合成法需要大量有機溶劑,存在原料來源及環(huán)境污染等問題在生產(chǎn)中極少使用;菌體自溶法由于其效率太低目前也基本不用;發(fā)酵法生產(chǎn)鳥嘌呤核苷由于其產(chǎn)率高、周期短、控制容易等優(yōu)點,目前已經(jīng)成為工業(yè)化生產(chǎn)鳥嘌呤核苷的重要方法。以枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)為發(fā)酵菌種制備核苷具有產(chǎn)量高、產(chǎn)物中副產(chǎn)物少、便于產(chǎn)物分離提取等優(yōu)點,因而,枯草芽孢桿菌成為核苷發(fā)酵工業(yè)最重要的生產(chǎn)菌。

20世紀60年代日本就大規(guī)模開展了發(fā)酵法生產(chǎn)鳥嘌呤核苷研究,主要側(cè)重于傳統(tǒng)的誘變育種技術(shù)改變菌種特性,提高鳥嘌呤核苷產(chǎn)量,最高達20g/L,而且近幾年對鳥嘌呤核苷發(fā)酵研究較少。而我國對鳥嘌呤系列的化合物的研究始于80年代,隨著鳥嘌呤核苷市場需求激增,越來越多的科研機構(gòu)對鳥嘌呤核苷發(fā)酵進行了全面深入的研究。

據(jù)調(diào)查顯示,目前國內(nèi)鳥嘌呤核苷發(fā)酵水平與世界先進水平有很大差距。主要原因是育種技術(shù)落后,菌種產(chǎn)苷水平不高;發(fā)酵周期長、轉(zhuǎn)化率及提取綜合收率低。因此,開發(fā)高產(chǎn)鳥嘌呤核苷工程菌和高效生產(chǎn)工藝是十分必要的。

一種提高枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)鳥嘌呤核苷產(chǎn)率的方法:

(1)搖瓶液體菌種培養(yǎng):

①選用枯草芽孢菌GDGR-1006為保藏菌種;②將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸、酵母粉、瓊脂、水按比例配制成初級菌種培養(yǎng)基裝入茄瓶;

③在步驟②所述的初級菌種培養(yǎng)基中接入保藏菌種,接種量為0.1%±0.02%,在溫度37℃±0.5℃條件下,靜置培養(yǎng)22h±2h后獲得初級菌種;

④將所述的初級菌種放入搖瓶培養(yǎng)基中,接種量為0.1%±0.02%,在往復式搖床上培養(yǎng),轉(zhuǎn)速160±10轉(zhuǎn)/分,溫度37℃±0.5℃,時間周期12-14h,當菌種鏡檢及OD等各項指標達標后即獲搖瓶液體菌種。

(2)高產(chǎn)率鳥苷發(fā)酵液制?。?/p>

①將葡萄糖液、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸、酵母粉、水按比例配制成二級菌種培養(yǎng)基,經(jīng)121℃±1℃、15min±1min的蒸汽滅菌后泵入二級種子罐,降溫至37℃±0.5℃后,接入步驟(1)④所述的搖瓶菌種,接種量為0.1%±0.02%,同時將經(jīng)過0.25~0.3Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入二級種子罐,此時通風比1∶0.2~0.4v/V.min,pH6~8,壓力0.03~0.1MPa,培養(yǎng)10h~12h,經(jīng)菌種鏡檢及OD等各項指標達標后即獲得二級菌種;

②將葡萄糖液、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸、酵母粉、水按比例配制成發(fā)酵培養(yǎng)基,經(jīng)121℃±1℃、15min±1min蒸汽滅菌后泵入發(fā)酵罐,降溫至37℃±0.5℃后接入二級菌種,接種量為10%;同時按照上述步驟(2)①中保壓無菌空氣輸入的條件下,將經(jīng)120℃±1℃、8min±1min蒸汽滅菌后的葡萄糖液與蘋果酸同時進行連續(xù)流加;此時通風比為1∶0.3~0.6v/V.min,pH6~8,壓力0.04MPa~0.1MPa,發(fā)酵50h~60h;當產(chǎn)苷達到45g/L±2g/L、轉(zhuǎn)化率28%±2%時,即獲得鳥嘌呤核苷發(fā)酵液。

主要參考資料

[1] 衛(wèi)生學大辭典

[2] 蔡傳康;王健;閆汝東.一種提高枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)鳥嘌呤核苷產(chǎn)率的方法.CN201110063895.X,申請日20110317

[3] 張科衛(wèi), 吳皓, 李偉. HPLC 同時測定半夏藥材中次黃嘌呤核苷, 鳥嘌呤核苷的含量[J]. 藥物分析雜志, 2005, 25(5): 487-489.