103475-41-8 / 替泊沙林的主要應(yīng)用

背景及概述^[1]

替泊沙林是一種同時(shí)具有抑制5-脂氧合酶和環(huán)氧合酶作用的有效抑制劑，具有抗炎、治療多種疼痛(手術(shù)后、關(guān)節(jié))及自身免疫性疾病等多種藥物活性。傳統(tǒng)方法中替泊沙林的合成第一步多采用異丙基氨化鋰、二異丙基氨化鎂或雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰等極易燃燒、危險(xiǎn)性很大的堿作為催化劑，并且要求低溫(−78℃)、無水、無氧，反應(yīng)條件苛刻，因此，找到一種反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)率較高的合成替泊沙林的新方法具有重要意義。

應(yīng)用^[1-2]

1）替泊沙林的鎮(zhèn)痛活性

由小鼠的扭體反應(yīng)試驗(yàn)可以看出，替泊沙林可明顯抑制小鼠因腹腔注射冰醋酸而出現(xiàn)的扭體反應(yīng)。灌服給藥后，該化合物顯著延緩小鼠首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間及減少1h內(nèi)的扭體次數(shù)。CMC對(duì)照組、雙氯酚酸鈉組、替泊沙林1.12、2.24及4.48mg·kg−3試藥組的扭體反應(yīng)潛伏期分別為3.7、13.0、11.5、12.6和15.1min；與上述組別相對(duì)應(yīng)的1h內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)分別為139.0、54.9、73.4、46.8及31.4次。方差分析結(jié)果表明：替泊沙林給藥組和CMC對(duì)照組間扭體反應(yīng)潛伏期及1h內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)均有顯著性差異(P<0.05)，且替泊沙林可劑量依賴性地延長注射冰醋酸后的扭體反應(yīng)潛伏期并減少1h內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，替泊沙林對(duì)扭體反應(yīng)的潛伏期及1h內(nèi)扭體次數(shù)的抑制作用和雙氯酚酸鈉無顯著性差異

2）替泊沙林對(duì)人結(jié)腸癌的抑制作用10只裸鼠皮下接種HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞建立人結(jié)腸癌模型，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。治療組以替泊沙林與5%羧甲基纖維素鈉溶液制成的混懸液給藥，對(duì)照組不作任何治療。治療期間觀察裸鼠皮下瘤體的生長情況，測(cè)算腫瘤體積。治療結(jié)束后處死裸鼠并取瘤，測(cè)量腫瘤質(zhì)量，檢測(cè)環(huán)氧合酶-2/5-脂氧合酶在腫瘤組織中的表達(dá)，用免疫組化方法檢測(cè)腫瘤微血管密度，用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移法酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果10只裸鼠全部成瘤，實(shí)驗(yàn)過程中無裸鼠死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：替泊沙林可抑制HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞的生長，可降低環(huán)氧合酶-2/5-脂氧合酶在人結(jié)腸癌細(xì)胞所致腫瘤組織中的表達(dá)水平，對(duì)誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞誘導(dǎo)的裸鼠皮下移植瘤具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤微血管生成作用。結(jié)論環(huán)氧合酶-2/5-脂氧合酶雙重抑制劑替泊沙林可能通過促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡、抑制腫瘤微血管生成，從而抑制結(jié)腸腫瘤的生長。

制備^[1，3]

1）4-氯-γ，ε-二氧代-苯己酸(1)的合成

將叔丁醇鉀(22.10g，0.20mol)用210mL無水四氫呋喃溶解，制成溶液。在溫度−15～10℃，將對(duì)氯苯乙酮(13.40g，0.09mol)溶于30mL四氫呋喃中，在40min內(nèi)用恒壓漏斗將其滴加到叔丁醇鉀的四氫呋喃溶液中，滴完后反應(yīng)0.5h。琥珀酸酐(10.51g，0.11mol)溶于170mL四氫呋喃中配成溶液，在溫度−15～10℃下，滴加到上述反應(yīng)液中，3.5h內(nèi)滴完。繼續(xù)反應(yīng)2h。室溫下，用稀鹽酸(40mL)(濃鹽酸∶水=1∶7，體積比)將反應(yīng)液的pH值調(diào)至4～5。將反應(yīng)液抽濾，濾餅用少量二氯甲烷或者四氫呋喃沖洗，所得濾液減壓蒸去溶劑，得到黃色棉絮狀物質(zhì)。依次用乙酸乙酯和水沖洗，得白色固體1(12.40g，0.05mol)，收率：56%。mp137～139℃。MS：m/z=277[M+Na]+。1HNMR(CDCl3)δ：2.76～2.83(m，4H，2-CH2，3-CH2)，6.16(s，1H，5-CH2)，7.42～7.44(d，2H，J=7Hz，Ph-H)，

7.78～7.81(d，2H，J=7Hz，Ph-H)，15.70(s，1H，OH)。

2）5-(4-氯-苯基)-1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡唑-3-丙酸(2)的合成

用甲醇作溶劑合成2將1mL干燥的三乙胺和40mL無水甲醇加入到100mL的燒瓶中，室溫下攪拌5min，然后加入對(duì)甲氧基苯肼鹽酸鹽(0.83g，4.75mmol)，繼續(xù)攪拌1h后，加入1(1.02g，4.00mmol)，繼續(xù)反應(yīng)7h，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液抽濾，濾液蒸干，得粗品。將粗品溶解到30mL二氯甲烷中，加入20mL水，用分液漏斗分出二氯甲烷，并用二氯甲烷(15mL×3)萃取水相，合并二氯甲烷，用無水硫酸鈉干燥過夜。干燥后過濾，濾液蒸干，用乙酸乙酯重結(jié)晶，得純品2(0.99g，1.67mmol)，產(chǎn)率70%。mp125～127℃。MS：m/z=357[M+H]+。1HNMR(CDCl3)δ：2.80～3.08(m，4H，2×CH2)，3.81(s，3H，CH3O)，6.33(s，1H，4-CH)，6.84～6.86(m，2H，Ph-H)，7.11～7.27(m，6H，Ph-H)。

3）5-(4-氯苯)-N-羥基-1-(4-甲氧基苯)-N-甲基-1H-吡唑-3-丙酰胺(替泊沙林)(3)的合成

以二氯甲烷作溶劑合成3將2(6.40g，17.90mmol)用無水二氯甲烷(202mL)溶解，配成溶液備用。將草酰氯(4.08g，32.14mmol)溶于無水二氯甲烷(200mL)，配成溶液，在冰浴冷卻下用恒壓漏斗慢慢滴加到上述2的二氯甲烷溶液中，2h內(nèi)加完，加完后撤掉冰浴，繼續(xù)在室溫下反應(yīng)3.5h，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液在無水條件下蒸干，所得固體物加無水二氯甲烷(100mL)溶解，備用。將N-甲基羥胺鹽酸鹽(2.67g，31.97mmol)、三乙胺(8.85g，87.70mmol)溶于無水二氯甲烷(200mL)配成溶液，在冰浴冷卻下滴加到上述備用液中，4.5h內(nèi)滴完，繼續(xù)室溫反應(yīng)14h。反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)液內(nèi)加入蒸餾水200mL，用分液漏斗分出二氯甲烷，二氯甲烷依次用5%稀鹽酸(200mL×2)、飽和食鹽水(200mL×1)洗滌，最后用無水硫酸鈉干燥過夜。干燥后濾去硫酸鈉，減壓蒸去二氯甲烷，得粗品3。粗品用快速色譜柱純化(洗脫液：乙酸乙酯∶石油醚∶三乙胺=20∶20∶1(體積比))，得純品3(3.50g，9.09mmol，產(chǎn)率50%)，mp124～126℃。HR-ESI-MSCalcd.(Found)[C20H20ClN3O3+H]+：386.1302(386.1271)。1HNMR(CDCl3)δ：2.94～3.22(m，4H，2×CH2)，3.17(s，3H，NCH3)，3.84(s，3H，CH3O)，6.32(s，1H，4-CH)，6.87～7.28(m，Ph-H，8H)，10.80(brs，1H，N-OH)。

主要參考資料

[1] 替泊沙林的新合成方法及其鎮(zhèn)痛活性的研究

[2] 替泊沙林對(duì)裸鼠結(jié)腸癌移植瘤的抑制作用

[3] CN200710053988.85-(4-氯-苯基)-N-羥基-1-(4-甲氧基-苯基)-N-甲基-1H-吡唑-3-丙酰胺的合成新方法及藥物用途