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真皮表皮結(jié)合部(DEJ)是一個(gè)復(fù)雜的結(jié)構(gòu),對維持皮膚結(jié)構(gòu)性和機(jī)械性起到至關(guān)重要作用。內(nèi)在和外在老化與DEJ扁平化及其一些組成蛋白質(zhì)的表達(dá)下降相關(guān)。這些變化參與到皮膚老化變脆和傷口愈合。L-鼠李糖是一種具有細(xì)胞促進(jìn)和抗炎特性的天然單糖,它的作用目標(biāo)是能被L-鼠李糖識別的凝集素表達(dá)細(xì)胞,如角質(zhì)形成細(xì)胞和乳頭狀成纖維細(xì)胞。由于角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞參與到DEJ的形成,我們研究L-鼠李糖對DEJ組分表達(dá)的影響。L-鼠李糖的皮膚吸收非常差,我們將其接到甲基硅烷三醇(MTS),一種賦予細(xì)胞促進(jìn)和結(jié)締組織重組功效的載體分子。
使用免疫熒光法測定四種DEJ重要組分的定位和表達(dá):
—層粘連蛋白5(Laminin5)是由角質(zhì)形成細(xì)胞生成的蛋白質(zhì),它結(jié)合基底角質(zhì)細(xì)胞質(zhì)膜和致密層(Lamina Densa)VII型膠原蛋白。單獨(dú)L-鼠李糖對此蛋白無顯著影響,而鼠李糖-硅烷醇(R-S)增強(qiáng)該蛋白表達(dá)(數(shù)據(jù):1% R-S增加18%, 5%R-S 增加18%)。
—基底膜蛋白多糖(Perlecan)是一種存在于所有基底膜的普遍的硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan),連接巢蛋白(nidogen)和IV型膠原蛋白。5%的R-S顯著提高基底膜蛋白多糖的表達(dá)(+25%)。
—IV型膠原蛋白(IV Collagen),基底膜的最豐富的膠原糖蛋白之一,是致密層的重要組成成分。單獨(dú)L-鼠李糖誘導(dǎo)適度的IV型膠原蛋白表達(dá)(+17%),而相同濃度的R-S極大地增強(qiáng)了膠原IV表達(dá)(+64%),在R-S低濃度(1%)時(shí)表達(dá)地增加已經(jīng)非常明顯(+41%)。
—VII型膠原蛋白(VII Collagen),一種位于致密層下方的大蛋白,被視為固定纖維(anchoring fibril)的主要成分,其靈活性是保持表皮-真皮結(jié)合力的必需。L-鼠李糖可以促進(jìn)VII型膠原蛋白表達(dá)(25%),而當(dāng)與硅烷醇聯(lián)合會協(xié)同增效這種促進(jìn)作用(58%)。
之后,通過在人體外移皮膚進(jìn)行的免疫熒光分析進(jìn)一步證明,L-鼠李糖通過與MTS結(jié)合,生物利用性和功效都增強(qiáng)。在此實(shí)驗(yàn)中,L-鼠李糖沒有明顯效果。值得注意的是,單獨(dú)MTS能夠促進(jìn)VII型膠原蛋白表達(dá)。R-S組合清晰地促進(jìn)VII型膠原蛋白表達(dá)和遷移到DEJ,表明,MTS促進(jìn)L-鼠李糖向負(fù)責(zé)合成VII型膠原蛋白(和許多其他DEJ成分)的真皮層成纖維細(xì)胞的傳遞。
老化影響到所有皮膚層:表皮層變薄和再生能力下降,真皮層細(xì)胞外間質(zhì)(ECM)下降并組織變差。我們因此測量其他參數(shù),以證明R-S對表皮層和真皮層的功效:
—Ki67核蛋白,一種表皮細(xì)胞循環(huán)的標(biāo)記蛋白。
—I型膠原蛋白,真皮層的主要膠原蛋白,其下降是衰老的標(biāo)志。如前所示,R-S能夠促進(jìn)DEJ組分(IV型膠原蛋白,層粘連蛋白5)的表達(dá)。此外,我們發(fā)現(xiàn)R-S促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖(Ki67)和真皮層I型膠原蛋白的表達(dá)。
老化極大影響到DEJ蛋白表達(dá),可以通過電子顯微鏡分析證實(shí)這些蛋白表達(dá)變化導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)變化。對比‘年輕’DEJ(39歲供體)和‘衰老’DEJ(68歲供體),強(qiáng)調(diào)出透明層(lamina lucida)組分的下降導(dǎo)致致密層減薄和密度減少。此外,我們可以觀察到乳頭真皮層細(xì)胞外間質(zhì)的固定纖維表達(dá)顯著下降。在衰老的人體外移皮膚上局部使用R-S糾正了所有這些參數(shù),恢復(fù)到參考型。
使用L-鼠李糖衍生物R-S處理人體外移皮膚(50-70歲供體)增加一些DEJ重要蛋白(免疫熒光染色方法)表達(dá),并提高DEJ超結(jié)構(gòu)(電子顯微鏡方法)。此外,我們的實(shí)驗(yàn)表明,表皮屏障是鼠李糖應(yīng)用的巨大障礙,MTS載體分子增強(qiáng)其生物利用性的辦法極大提高這種糖的人體功效。