手機掃碼訪問本站
微信咨詢
乙醇脫氫酶（Alcohol dehydrogenase，ADH）是一種含鋅酶類，在機體內(nèi)分布有較高器官特異性，在肝臟內(nèi)最為豐富。在正常機體生理代謝中，ADH能夠催化乙醇（酒精）代謝。在臨床上，血液中ADH的含量是診斷肝臟疾患的指標(biāo)之一，在正常情況下，ADH在肝臟中含量最高，血清中的ADH是恒定的。當(dāng)在肝臟受損時，如急性中毒性肝損傷、酒精肝病、慢性活動肝炎等，ADH由細(xì)胞內(nèi)釋放到血清中，從而引起ADH在血清中升高。
目前在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了7種亞型，分別為ADH1A、ADH1B、ADH1C、ADH4、ADH5、ADH6和ADH7
ADH1B晶體結(jié)構(gòu)
目前人源的ADH的獲取主要通過原核表達(dá)方式生產(chǎn)，主要是通過肝臟中提取mRNA，經(jīng)RT-PCR擴增目的基因，構(gòu)建至表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化至表達(dá)感受態(tài)，獲量表達(dá)ADH蛋白的大腸桿菌，以M9培養(yǎng)基對大腸桿菌大量培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達(dá)，大量制備出ADH蛋白，經(jīng)相應(yīng)的純化工藝，獲得純品ADH。此生產(chǎn)方式成本低，需要的設(shè)備相對較少，其中最常用和重要的是大腸桿菌培養(yǎng)基，它是影響ADH的產(chǎn)量關(guān)鍵因素之一，目前市面常用的是M9，配制簡單，且原材料易于獲取。
人血清中乙醇脫氫酶檢測
目前監(jiān)測人血清中ADH含量的常用方法是雙抗夾心酶聯(lián)免疫分析（ELISA）。該方法是敏感性高，特異性強，操作簡易，且結(jié)果易于觀察。其主要原料是ADH和兩個ADH抗體，分別用于包被和標(biāo)記酶。首先將ADH抗體包被到ELISA板中，制成固相抗體，在微孔中加入不同濃度的ADH標(biāo)品進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)過洗滌去除非特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的抗體，進(jìn)行反應(yīng)，形成ADH抗體—ADH—酶標(biāo)記的ADH抗體的復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后，加入酶底物和顯色劑，在酶催化底物后，液體呈現(xiàn)顯色反應(yīng)，顯色強弱與ADH的含量呈正比，在酶標(biāo)儀中讀取OD450/ OD600值。以O(shè)D450/ OD600值縱坐標(biāo)（y軸），以ADH不同的濃度為橫坐標(biāo)（x軸），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程。將待測血清加入ELISA試劑盒 中進(jìn)行檢測，根據(jù)其OD值，代入方程，計算出相應(yīng)含量。
在試劑盒建立過程， 除主要原料影響之外，其中影響最大的就是稀釋液。如抗體稀釋液、ADH稀釋液，都會影響到試劑盒的特異性和穩(wěn)定性，目前，在稀釋液中都會添加一種或多種成份如BSA、酪蛋白、雞標(biāo)準(zhǔn)血清、牛血清、馬血清等等，來提高試劑盒的抗干擾能力和穩(wěn)定性。
[1] 盧現(xiàn)英.ADH檢測的臨床新研究[J].中外醫(yī)療.2011.01(c):0192
[2] Niederhut, M.S., Gibbons, B.J., Perez-Miller, S., Hurley, T.D.Three‐dimensional structures of the three human class I alcohol dehydrogenases [J].Protein Science.2001,10(4):697-706