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4-溴丁酸叔丁酯是一種有機(jī)中間體，可由4-溴丁酸和叔丁醇酯化后得到。有文獻(xiàn)報道4-溴丁酸叔丁酯可用于制備一種丁香酚人工抗原和一種檢測異菌脲的試紙條。
將4-溴丁酸(3.0g，16.57mmol，1.0eq)同于20mL無水四氫呋喃中，冷卻到-40℃，逐滴加入三氟乙酸酐(6.96g，33.14mmol，2.0eq)，-40℃攪拌30分鐘，加入叔丁醇(9.83g，132.56mmol，8.0eq)逐漸升值室溫，反應(yīng)過夜。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)體系倒入飽和碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉洗滌，減壓濃縮得到3.75g淡黃色油狀物，收率為95％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.41(t，J＝6.7Hz，2H)，2.25(t，J＝7.3Hz，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.79-1.68(m，2H)，1.44(s，9H).
將1M三溴化硼(39ml，39mmol)加入丁內(nèi)酯(3ml，39mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液。室溫下攪拌混合物20h，然后用過量叔丁醇猝滅。室溫下攪拌混合物2h，用二氯甲烷稀釋，用飽和NaHCO3，飽和Na2S2O3然后鹽水洗滌，干燥并真空濃縮。通過快速硅膠色譜法通過isolute純化殘余物(洗脫劑；5％EtOAc∶95％己烷)以獲得4-溴丁酸叔丁酯(3g，34％)。
一種丁香酚人工抗原的合成方法，其由以丁香酚與4-溴丁酸叔丁酯反應(yīng)得到具有羧基的產(chǎn)物，即為半抗原Euy，再用碳二亞胺法將半抗原Euy與載體蛋白偶聯(lián)，即得到丁香酚的人工抗原。
1、丁香酚人工抗原的制備步驟為：
（1）半抗原Euy的合成：
MGD_4_1：將K2CO3（378.75mg，2.74mmol）加入到攪拌的4-烯丙基-2-甲氧基苯酚（300mg，1.83mmol）DMF（5mL）溶液中。在室溫下攪拌15min后，將4-溴丁酸叔丁酯（428mg，1.92mmol）緩慢加入混合物中。然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16h。將水（50mL）加入到反應(yīng)混合物中，混合物用EtOAc（3×25mL）進(jìn)行萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水（25mL）洗滌，并用Na2SO4干燥，真空濃縮，得到無色油狀物，將其通過快速柱色譜法純化，得到4-（4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基）丁酸叔丁酯（462mg，1.51mmol，產(chǎn)率82.53％），為無色油狀物，即化合物MGD_4_1。
MGD_4：將4-（4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基）丁酸叔丁酯（924mg，3.02mmol）DCM（5mL）溶液冰浴冷卻并攪拌，往溶液中緩慢加入TFA（5mL）。將混合物在0℃下攪拌3h。然后將混合物真空濃縮，得到稻草黃色油狀物，將其通過快速柱色譜法純化，得到4-（4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基）丁酸（474mg，1.89mmol，收率62.80％），為淡黃色固體MGD_4，MGD_4即半抗原Euy。
（2）完全抗原Euy-EDC-BSA的制備：采用碳二亞胺法將步驟（1）獲得的半抗原Euy與牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)，得到偶聯(lián)物完全抗原Euy-EDC-BSA。
所述丁香酚人工抗原的合成方法，步驟（2）所述完全抗原Euy-EDC-BSA的制備方法如下：
a、稱取步驟（1）獲得的半抗原Euy2.2mg，1-乙基碳二亞胺鹽酸鹽6.7mg，N-羥基琥珀酰亞胺4.0mg，溶解于400μLN,N-二甲基甲酰胺DMF溶液中（稱為A液），室溫攪拌反應(yīng)4-6h。取10mg牛血清白蛋白BSA（Euy與牛血清白蛋白BSA摩爾比為60︰1），加入2mLpH8.6、0.01M碳酸鹽緩沖溶液CB（稱為B液），在室溫下逐滴將A液緩慢加入到B液中，室溫反應(yīng)過夜；即得偶聯(lián)物Euy-EDC-BSA混合液；
b、透析：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去離子水沖洗3min，保存在4℃去離子水中備用；將偶聯(lián)物Euy-EDC-BSA混合液放入透析袋，并用pH=7.2、0.01M磷酸鹽緩沖溶液PBS透析3天，每天換三次透析液，除去未反應(yīng)的小分子半抗原，得到完全抗原Euy-EDC-BSA，并通過紫外吸收掃描方法進(jìn)行鑒定。
3、丁香酚人工抗原的鑒定
（1）采用核磁共振和液質(zhì)聯(lián)用方法鑒定半抗原。
（2）采用紫外法鑒定人工抗原的偶聯(lián)效果，利用偶聯(lián)物中小分子與蛋白的濃度，計算其偶聯(lián)比。
偶聯(lián)比測定：估算偶聯(lián)物中被偶聯(lián)的兩種分子的比率（偶聯(lián)比率）的方法，雖然測定方法種類很多，但都是依據(jù)檢測偶聯(lián)物中被偶聯(lián)的兩種分子含量（或相對含量）的原理建立起來的。紫外法是依據(jù)合成的人工抗原中的分子的摩爾濃度與蛋白的摩爾濃度的比確定偶聯(lián)比的。
用PBS配制0.5mg/mL的蛋白溶液與完全抗原溶液，以PBS建立基線，在波長200~500nm間掃描，得到蛋白溶液與完全抗原溶液在半抗原的紫外吸收特征峰處的吸光值分別為A1，A2；用甲醇配制的半抗原為Xμg/mL，以甲醇建立基線，在波長200~500nm間掃描，得到半抗原紫外吸收特征峰處的吸光值A(chǔ)3，半抗原的相對分子質(zhì)量為M1，蛋白的相對分子質(zhì)量為M2，則偶聯(lián)比=[(A2-A1)(X/M1)/A3]/(0.5/M2)
本方法成功合成丁香酚的人工抗原，合成步驟簡單、安全、有效，完全可用于免疫分析中，為以后的研究提供了必需的人工抗原。
CN201510973150.5報道了4-溴丁酸叔丁酯可用于制備一種檢測異菌脲的試紙條，包括樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜、吸水墊和底板，所述反應(yīng)膜上有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)包被有異菌脲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控區(qū)包被有抗抗體，所述結(jié)合物釋放墊噴涂有異菌脲特異性抗體-膠體金標(biāo)記物。異菌脲特異性抗體-膠體金標(biāo)記物中的異菌脲特異性抗體是以異菌脲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得，所述異菌脲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物是以異菌脲半抗原與載體蛋白偶聯(lián)制備得到。所述異菌脲半抗原是由2，6-二氯-4-硝基苯酚為起始原料，經(jīng)過與4-溴丁酸叔丁酯的烴基化反應(yīng)得到羥基2，6-二氯-4-硝基苯，還原硝基后，得到烴基2，6-二氯苯胺，烴基2，6-二氯苯胺在碳酰氯的作用下，與氨基乙酸縮合，得到烴基2，6-二氯苯甘氨酸酯，再經(jīng)過成環(huán)反應(yīng)，得到異菌脲主體結(jié)構(gòu)化合物，該化合物再經(jīng)碳酰氯作用，與異丙胺縮合，得到異菌脲母核結(jié)構(gòu)化合物，在酸性條件下水解反應(yīng)得到的。