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乙酰丁香酮，英文名 Acetosyringone,分子式 HOC6H2 (OCH3)2COCH3,分子量 196. 20。20世紀(jì)80年代植物基因工程技術(shù)誕生以來，針對不同植物或同一植物的不同組織創(chuàng)建了許多轉(zhuǎn)化方法，并在此基礎(chǔ)上不斷進(jìn)行改良，其目的都是在提高轉(zhuǎn)化材料的轉(zhuǎn)化頻率及轉(zhuǎn)基因在轉(zhuǎn)基因材料中的穩(wěn)定遺傳和表達(dá)。不過，直到目前為止，關(guān)于如何能盡可能地提高轉(zhuǎn)化頻率仍然是有待深入研究的課題。
乙酰丁香酮AS是在這個研究領(lǐng)域大家公認(rèn)的可提高轉(zhuǎn)化率的試劑。關(guān)于AS可促進(jìn)農(nóng)桿菌對植物基因的轉(zhuǎn)化已經(jīng)有過很多報道[1]。1984年，Shaw等[2]試驗表明，農(nóng)桿菌對酚類化合物具有趨化性；1985年，Stachel等[I]觀察到葉子的受傷部分與非受傷部分對比有明顯的誘導(dǎo)作用。1988年Owens等[3]混合農(nóng)桿菌菌株與酚類化合物轉(zhuǎn)化大豆細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)酚類化合物的加入能夠提高大豆細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率。中國學(xué)者許耀等[4]在國內(nèi)首次證明受AS等創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子激活的vir區(qū)基因的活化和高效表達(dá)是農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒向宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)移所必需的，并能提高其轉(zhuǎn)化頻率。
隨后趙東利等[5]為了了解AS和超聲波處理在提高轉(zhuǎn)化率方面是否存在協(xié)同作用，結(jié)果證明AS的存在可使子葉和下胚軸的轉(zhuǎn)化率在原來的基礎(chǔ)上又分別提高了 9. 9%和7.6%，表明二者在提高發(fā)根農(nóng)桿菌對苦豆子的轉(zhuǎn)化率方面具有明顯的協(xié)同作用。陳丙春等[6]在藍(lán)豬耳遺傳轉(zhuǎn)化研究中發(fā)現(xiàn)，AS濃度對轉(zhuǎn)化芽誘導(dǎo)率有顯著影響。
蘇紹坤等[7]在雙子葉植物黃瓜的轉(zhuǎn)化研究中，發(fā)現(xiàn)不加入AS時轉(zhuǎn)化率比加入AS時的轉(zhuǎn)化率低約50%，證明加入AS對雙子葉植物的轉(zhuǎn)化也有促進(jìn)作用。劉明志[8]以懸浮細(xì)胞為遺傳轉(zhuǎn)化受體，研究了酚類化合物(AS及其他酚類復(fù)合物）對農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化胡蘿卜的影響，結(jié)果表明，農(nóng)桿菌經(jīng)酚類化合物預(yù)處理后，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)化率提高8. 5?12倍。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種乙酰丁香酮的簡單合成方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
一種乙酰丁香酮的合成方法，該方法包括如下步驟：
(1)將P2O5粉末加入到磷酸水溶液中，使用中高溫水浴加熱10?20分鐘使P2O5充分溶解于其中；
(2)向步驟（1)的混合液中加入溶解了 2，6-二甲氧基苯酚的醋酸，混合液持續(xù)加熱15-30分鐘；
(3)將步驟（2)得到的混合液冷卻，再加入到水中，然后用乙醚萃取，收集乙醚層；
(4)將乙醚層干燥后，濃縮揮發(fā)溶劑，再將濃縮物溶解于甲醇，結(jié)晶即得。
步驟（1)中，磷酸水溶液的質(zhì)量百分濃度為50?85%。
步驟（1)中，P2O5粉末與磷酸水溶液的質(zhì)量比為3?1 :1。
步驟（1)中，中高溫水浴溫度為50?95°C。
步驟⑵中，2，6-二甲氧基苯酚與醋酸的質(zhì)量比為I?4 ： 1。
步驟（2)中，2，6-二甲氧基苯酚與P2O5粉末的質(zhì)量比為1 : 4?9。
步驟（3)中，乙醚萃取2?3次。
步驟⑷中，濃縮溫度為25?45°C。
步驟（4)中，乙醚層干燥方式為無水硫酸鈉干燥。
有益效果：本發(fā)明方法工藝簡單、工藝流程短，成本低。
根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
60g P2O5粉末加入到60g 85 %磷酸水溶液中，在90°C水浴中加熱15分鐘，然后向酸液中加入溶解了 7. 7g 2，6- 二甲氧基苯酚的4. 5g醋酸溶液中，混合物持續(xù)加熱30分鐘。冷卻后，將反應(yīng)混和物加入到500mL水中，然后用乙醚萃取三次，萃取得到的有機物質(zhì)經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，35°C水浴溫度下濃縮揮發(fā)溶劑，再將生成物溶解于甲醇，結(jié)晶得到純度99%以上的乙酰丁香酮，生成物熔點126-127℃，生成物乙酰丁香酮2. 6g。