84-74-2 / 二丁酯的提取方法

背景及概述^[1][2]

二丁酯又叫鄰苯二甲酸二丁酯（Dibutylphthalate，DBP），是一種優(yōu)良的增塑劑，由于其相對(duì)價(jià)廉且加工性好，在國(guó)內(nèi)外使用非常廣泛。二丁酯對(duì)于多種樹脂具有很好的溶解能力，具有色澤淺、電性能好、揮發(fā)性低、氣味小和耐低溫等特點(diǎn)。二丁酯是硝化纖維、醋酸纖維、聚氯乙烯等的理想增塑劑，具有良好的軟化作用和優(yōu)良的穩(wěn)定性、粘著性、耐撓曲性和防水性。此外，二丁酯也用于制造油漆、膠粘劑、人造纖維、印刷油墨、安全玻璃、染料、殺蟲劑、香料的溶劑和織物潤(rùn)滑劑等化工產(chǎn)品。

二丁酯能引起中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的功能性變化，然后進(jìn)一步引起它們組織上的改變；有趨肝性，可引起輕度致敏作用，具有中等程度的蓄積作用和輕度刺激作用，是一種可疑的內(nèi)分泌干擾素。目前美國(guó)、歐盟等多國(guó)都明確禁止或限制使用二丁酯，我國(guó)也鼓勵(lì)使用其他化學(xué)品替換有毒有害的二丁酯添加在日化用品中。

檢測(cè)^[1]

CN201310185247.0提供一種二丁酯檢測(cè)試劑盒和一種二丁酯檢測(cè)試劑盒的制備和使用方法，該試劑盒在檢測(cè)二丁酯時(shí)可一次連續(xù)檢測(cè)多個(gè)樣品，具有便捷，快速，靈敏、成本低的特點(diǎn)。檢測(cè)試劑盒主要包括：

1）包被二丁酯特異性抗原的酶標(biāo)板：所述酶標(biāo)板的每個(gè)微孔內(nèi)二丁酯特異性抗原的濃度為1?5μg/mL；

2）二丁酯單克隆抗體工作液：該二丁酯單克隆抗體工作液的濃度為1?5μg/mL；

上述二丁酯檢測(cè)試劑盒的制備方法，主要包括以下步驟：

1）制備二丁酯特異性抗原

將鄰苯二甲酸與2?乙基己醇混合于環(huán)己烷中，加入濃硫酸作為催化劑，回流反應(yīng)，制得2?（2?乙基己酯）苯甲酸；將上述2?（2?乙基己酯）苯甲酸與2?乙基?6叔丁氧酰胺丙醇混合于環(huán)己烷中，加入濃硫酸，回流反應(yīng)，制得二丁酯被叔丁氧酰胺基胺化產(chǎn)物；隨后將上述中間產(chǎn)物加入三氟乙酸中，回流反應(yīng)，脫去叔丁氧?；谋Ｗo(hù)，裸露出胺基，制得能夠與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的氨基二丁酯的半抗原；在N?羥基丁二酰胺和碳二亞胺的催化下，再與載體蛋白偶聯(lián)，制得二丁酯特異性抗原；所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白、兔血清白蛋白或甲狀腺球蛋白；

2）包被酶標(biāo)板

將上述二丁酯特異性抗原包被于酶標(biāo)板中，所述酶標(biāo)板的每個(gè)微孔內(nèi)二丁酯特異性抗原的濃度為1?5μg/mL；

3）動(dòng)物免疫

以步驟1）中合成的二丁酯特異性抗原為免疫原免疫小鼠，取免疫小鼠的血清，檢測(cè)該血清抗二丁酯的效價(jià)和抑制價(jià)，選取效價(jià)和抑制價(jià)最高的免疫小鼠；

4）細(xì)胞融合與篩選

取步驟3）所得免疫小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合；采用有限稀釋法篩選雜交瘤細(xì)胞，得到完全同質(zhì)的單克隆抗體和穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，并取不完全佐劑腹腔注射進(jìn)行致敏后的小鼠，將雜交瘤細(xì)胞混懸液注射到小鼠腹腔中，收集腹水，經(jīng)辛酸?硫酸銨沉淀法進(jìn)行腹水純化，得到純化的二丁酯單克隆抗體；制備濃度為1?5μg/mL的二丁酯單克隆抗體工作液。

上述二丁酯檢測(cè)試劑盒的使用方法，主要包括以下步驟：

1）樣品前處理

準(zhǔn)確稱取涂料樣品，有機(jī)溶劑溶解后，用水稀釋至樣品重量：溶液體積比為1：106，例如：1g樣品最終稀釋至1000L，0.1g樣品最終稀釋至100L，定容，超聲提取10?30min，得到樣品檢測(cè)液；

2）檢測(cè)

用上述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，向包被有二丁酯特異性抗原的酶標(biāo)板中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品檢測(cè)液，再加入二丁酯單克隆抗體工作液，溫育后洗板，加入酶標(biāo)二抗工作液進(jìn)行酶活性的放大，再次洗板，加入顯色液、終止液，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值；

3）結(jié)果分析

以抑制率I%為縱坐標(biāo)，以二丁酯濃度的對(duì)數(shù)lg[二丁酯(μg/L)]為橫坐標(biāo)，繪制二丁酯競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線；將樣品的抑制率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣品中二丁酯的實(shí)際含量。

廢水處理^[2]

CN201410225022.8公開了一種含高濃度二丁酯有機(jī)廢水的處理方法。本發(fā)明所述的含高濃度二丁酯有機(jī)廢水的處理方法，先調(diào)節(jié)pH至堿性，充分?jǐn)嚢?，使其分為上層富含二丁酯的油相和下層含二丁酯以及其他有機(jī)物的水相溶液，分離上層油相回收二丁酯，下層水相溶液利用過(guò)氧化氫-濕式氧化的方法進(jìn)行氧化處理，處理后的下層水相溶液其COD去除率為65~80%，二丁酯的質(zhì)量含量降為0.01~0.55%，可達(dá)到無(wú)害化處理。本發(fā)明所述的含高濃度二丁酯有機(jī)廢水的處理方法，充分實(shí)現(xiàn)了資源回收，降低了處理廢水所需要的能耗。

提取方法^[3]

CN201710367720.5提供一種從海洋球石藻中提取二丁酯的方法，旨在通過(guò)薄層層析法、硅膠柱層析法、凝膠柱層析法、制備型薄層PTLC等方法對(duì)海洋球石藻乙酸乙酯相提取物的二丁酯進(jìn)行分離、純化，以便于后續(xù)大規(guī)?；a(chǎn)二丁酯。

提取二丁酯的方法具體包括以下步驟：

步驟一、制備海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物：先用乙醇溶液浸提，獲得乙醇浸膏，再以乙酸乙酯為萃取劑進(jìn)行萃取處理，合并萃取液，減壓濃縮得到海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

海洋球石藻生長(zhǎng)至穩(wěn)定期，收獲，冷凍干燥獲得海洋球石藻藻粉19.3740g，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的乙醇浸提，獲得乙醇浸膏5.1247g，加入等體積的乙酸乙酯和水，反復(fù)萃取，收集乙酸乙酯相，合并、減壓濃縮至干，獲得海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物4.2357g；

步驟二、反相硅膠柱層析制備二丁酯一次粗品：將獲得的海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物以反相硅膠柱進(jìn)行層析處理，收集，檢測(cè)、合并、減壓濃縮至干，得到二丁酯一次粗品；

將4.2357g海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物用適量的分析純甲醇溶解后，進(jìn)行反相硅膠(180g)柱層析；依次用水，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的甲醇溶液，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的甲醇溶液，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的甲醇溶液，甲醇洗脫，每個(gè)梯度洗脫1.5L，流速控制為30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并棕櫚酸高濃度流分段，減壓濃縮至干，獲得二丁酯一次粗品；

步驟三、葡聚糖凝膠柱SephadexLH-20層析制備二丁酯二次粗品：將二丁酯一次粗品以葡聚糖凝膠柱SephadexLH-20進(jìn)行層析處理，收集，檢測(cè)、合并、減壓濃縮至干，得到二丁酯二次粗品；

將海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物一次粗品用適量甲醇溶解后，上葡聚糖凝膠柱SephadexLH-20，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，流速控制12-13S/drop，使用自動(dòng)收集器收集各餾分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并80至90管的餾分，減壓濃縮至干，獲得二丁酯二次粗品；

步驟四、反相硅膠柱層析制備二丁酯一次精品：將獲得的二丁酯二次粗品以反相硅膠柱進(jìn)行層析處理，收集，檢測(cè)、合并、減壓濃縮至干，得到二丁酯一次精品；

將二丁酯二次粗品，依次采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30％，40％，50％，60％，70％的甲醇水梯度洗脫，最后用甲醇洗脫進(jìn)行反相硅膠柱層析，每個(gè)梯度洗脫300mL，流速控制為5mL/min，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并二丁酯高濃度流分段，減壓濃縮至干，獲得二丁酯一次精品；

步驟五、正相硅膠柱層析制備二丁酯二次精品：將獲得的二丁酯一次精品以正相硅膠柱進(jìn)行層析處理，收集，檢測(cè)、合并、減壓濃縮至干，得到二丁酯二次精品；

將二丁酯一次精品經(jīng)過(guò)正相硅膠柱層析，用硅膠粉拌樣，硅膠用石油醚飽和后裝柱，樣品上柱后用石油醚和丙酮體系進(jìn)行洗脫，石油醚和丙酮的體積比為200：1，收集餾分，減壓濃縮至干，獲得二丁酯二次精品；

步驟六、PTLC制備二丁酯純品：將獲得的二丁酯二次精品進(jìn)行PTLC，點(diǎn)樣、展開，刮板，樣品回收，保存于-20℃，得到二丁酯純品；

將二丁酯二次精品經(jīng)過(guò)PTLC，最終得到二丁酯：采用高效薄層層析板，在體積比為：石油醚：乙酸乙酯＝80：1的展開劑中展開，前后兩端顯色，用刀片刮取中間部分，合并，用甲醇溶解，高速離心，收集上清液，減壓濃縮至干，最終得到二丁酯。

主要參考資料

[1][中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)]CN201310185247.0鄰苯二甲酸二丁酯檢測(cè)試劑盒及其制備和使用方法

[2]CN201410225022.8一種含高濃度鄰苯二甲酸二丁酯有機(jī)廢水的處理方法

[3][中國(guó)發(fā)明]CN201710367720.5一種從海洋球石藻中提取鄰苯二甲酸二丁酯的方法