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秋水仙堿,一種生物堿,最初從百合科植物秋水仙中提取出來,也稱秋水仙素。呈黃色針狀結(jié)晶,易溶于水、乙醇和氯仿,味苦,有毒。秋水仙堿能抑制有絲分裂,破壞紡錘體,使染色體停滯在分裂中期。這種由秋水仙堿引起的不正常分裂,稱為秋水仙堿有絲分裂。在這樣的有絲分裂中,染色體雖然縱裂,但細(xì)胞不分裂,不能形成兩個子細(xì)胞,因而使染色體加倍。自1937年美國學(xué)者布萊克斯利(A.F.Blakeslee)等,用秋水仙堿加倍曼陀羅等植物的染色體數(shù)獲得成功以后,秋水仙堿就被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)的研究和植物育種中。
我國的天然植物資源十分豐富。植物體內(nèi)的成分是由復(fù)雜的化學(xué)成分組成,其中主要有生物堿、菇類、幽體、貳類、黃酮體、蕙醒、香豆素有機酸、氨基酸、單糖、低聚糖、多糖、蛋白質(zhì)、酶等,一般認(rèn)為這類物質(zhì)具有藥用價值。而纖維素、葉綠素、蠟、油脂、樹脂和樹膠等,雖然也具有一定的經(jīng)濟價值,但在研究植物生理活性成分時往往作為雜質(zhì)除去。
要充分開發(fā)利用植物資源,必須從復(fù)雜的植物組成成分中將附加值高的有效成分提取分離出來,才能更好地加以研究和利用。天然植物中有效成分的提取已成為國內(nèi)外的研究熱點。
生物堿是一類重要的天然有機化合物,它是指含負(fù)氧化態(tài)氮原子的存在于生物有機體的環(huán)狀化合物。自從1806年德國學(xué)者F.W.Serturner從鴉片中分出嗎啡堿(morpihen)以后,迄今已從自然界分出約1000種生物堿。生物堿大多具有生物活性,是許多藥用植物的有效成分。研究發(fā)現(xiàn),從天然植物中提取的生物堿,具有更多的藥用價值,已遠遠超過植物本身的價值。百合中的生物堿一秋水仙堿就是一個典型的例子。秋水仙堿(colhciicen)最初是從百合科植物秋水仙中發(fā)現(xiàn)的重要生物堿,是一種罩酚酮類生物堿,能抑制細(xì)胞有絲分裂、抑制癌細(xì)胞的增長,臨床上用來治療癌癥、痛風(fēng)等?。磺锼蓧A還是細(xì)胞生物技術(shù)常用試劑。
從植物中提取秋水仙堿的傳統(tǒng)方法一般是溶劑提取法。此法的優(yōu)點是儀器和材料簡單易得,方法比較簡便,但試劑消耗量大。溶劑提取法的基本原理是:根據(jù)秋水仙堿的性質(zhì),利用它在不同溶劑中溶解度的差別,按一定的步驟和方法進行分離。根據(jù)所用溶劑的不同,傳統(tǒng)提取方法可分為水提法、酸提法、有機溶劑提取法。提取出來的含秋水仙堿的混合物還需經(jīng)柱層析、薄層層析{釗〕、離子交換色譜等分離方法進行進一步分離純化。
植物粉末經(jīng)水提盡秋水仙堿,于濃縮的提取液中加堿堿化后,再自其中用與水不相混溶的有機溶劑提取游離秋水仙堿,蒸去溶劑可得濃縮的秋水仙堿粗制品。水當(dāng)然是最便宜的溶劑,安全是其優(yōu)點,但也存在一定的局限性。例如,被水溶出的親水性雜質(zhì)太多,使后處理困難,秋水仙堿不易被精制提純。
一般用濃度在0.1-1%的稀酸溶液進行提取,因此叫稀酸提取法。此法常用的酸為鹽酸、硫酸或醋酸,其目的是使植物中的秋水仙堿(生物堿)轉(zhuǎn)化為鹽類,提高其在水中的溶解度,從而易于提取。這種方法是在常溫下將樣品置于帶塞的容器內(nèi),準(zhǔn)確加入一定量的稀酸,搖勻后靜置,浸泡12-48小時。稀酸提取法的優(yōu)點是不需高溫加熱,因此不會破壞有效成份,是一種經(jīng)濟而又簡便的提取方法。但稀酸提取法和水提取法一樣,浸取液中存在著較多的水溶性雜質(zhì),如皂貳、蛋白質(zhì)、糖類、鞭質(zhì)、水溶性色素等。
有機溶劑提取法根據(jù)所用溶劑是否與水相溶,又分為A、B兩種:
A、用與水能混溶的有機溶劑提取用乙醇、甲醇、丙酮等直接從植物中提出秋水仙堿,再回收溶劑,就能得到濃縮生物堿的提取液,其中尤以乙醇的應(yīng)用最為普遍,用酒精為溶劑的方法具有一定優(yōu)點:例如酒精易透入中草藥組織內(nèi)部,也容易提盡原料中的生物堿,原料不需要預(yù)先用堿溶液處理,簡化了操作,同時酒精對溶解植物成分的選擇性比水高,提取出的雜質(zhì)比水少,從而容易進一步提純。
B、用與水不混溶的有機溶劑提取通常先將中草藥粉末加適量稀碳酸鈉溶液或稀氨水?dāng)嚢铦駶?,促使秋水仙堿游離,陰干后再用乙醚、二氯甲烷、氯仿、苯或甲苯等有機溶劑自其中萃取。此法的優(yōu)點是比較容易得到純品,提取出的雜質(zhì)比較少,但是缺點不少:如工業(yè)生產(chǎn)上的不安全性;溶劑毒性大、價格昂貴;不易提盡原料中的秋水仙堿等。
秋水仙堿可與微管蛋白二聚體結(jié)合,阻止微管蛋白轉(zhuǎn)換,使細(xì)胞停止于有絲分裂中期,從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
秋水仙堿通過干擾溶酶體脫顆粒降低中性粒細(xì)胞的活性、黏附性及趨化性,抑制粒細(xì)胞向炎癥區(qū)域的游走,從而發(fā)揮抗炎作用。另外,它干擾細(xì)胞間黏附分子及選擇素的表達,從而阻礙T淋巴細(xì)胞活化及對內(nèi)皮細(xì)胞的黏附,抑制炎癥反應(yīng)。秋水仙堿還可通過減少E-選擇素、L-選擇素及內(nèi)皮素的表達,發(fā)揮其抗炎作用。
動物實驗發(fā)現(xiàn)秋水仙堿能降低中毒性肝壞死的雄鼠死亡率,阻止四氯化碳引起的大鼠肝纖維化并改善其肝功能,國內(nèi)實驗也證實秋水仙堿可減少肝臟膠原纖維的形成,減輕肝纖維化。臨床試驗證明秋水仙堿確具有改善癥狀,縮小肝脾,使肝內(nèi)纖維組織減少,肝血流量有所增加??傊?,體內(nèi)外實驗表明,秋水仙堿能夠明顯抑制成纖維細(xì)胞增生,抑制膠原(Ⅰ、Ⅲ型)mRNA表達及蛋白合成分泌,促進膠原酶活性,促進基質(zhì)金蛋白酶MMP-1,MMP-9活性增強,從而減少膠原的產(chǎn)生和沉積,促進膠原分解,起到抗纖維化的作用。
抑制肥大細(xì)胞釋放組胺顆粒、抑制胰島β細(xì)胞釋放胰島素,并抑制黑色素細(xì)胞內(nèi)黑色素顆粒的移動。
秋水仙堿可以降低體溫,抑制呼吸中樞、增強擬交感藥物的作用,收縮血管、升高血壓。秋水仙堿還可通過神經(jīng)元刺激增強胃腸道功能以及改變神經(jīng)肌接頭的功能。由于秋水仙堿有抑制細(xì)胞分裂,同時還可以干擾腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)代謝,抑制RNA多聚酶活力以及細(xì)胞膜類脂質(zhì)的合成和氨基酸在細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運,從而誘導(dǎo)多種實體腫瘤細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)秋水仙堿在體外對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長有明顯的抑制和誘導(dǎo)凋亡作用,但體內(nèi)的效果尚待臨床研究。