12627-53-1 / 瑞特染色劑的應(yīng)用

背景及概述^[1][2]

瑞特染色劑是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成有復(fù)合染料。亞甲藍(lán)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料。市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。即伊紅和伊混合后，產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅美藍(lán)中性沉淀，即瑞特染色劑。

瑞特染色劑，直接使用，無需任何配制過程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇揮發(fā)或氧化，同時(shí)也可使血細(xì)胞染色較清晰。經(jīng)常用于血液和細(xì)胞涂片、骨髓細(xì)胞涂片、細(xì)菌染色。細(xì)胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核及細(xì)菌呈藍(lán)色，嗜酸性顆粒呈橘紅色。

理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)^[1]

新鮮配制的瑞特染色劑偏堿性，須在室溫或是37℃下貯存一定時(shí)間，待瑞特染色劑成熟，主要是美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后才能使用，貯存時(shí)愈久，染色效果愈好。EAmGILLILAND等采用吸光度比值作為瑞特染色劑的質(zhì)量規(guī)格。rA測定方法如下：取瑞特染液15-25μl（視染液濃度而定），加甲醇10ml稀釋，混勻后以甲醇為空折管，分別以波長650nm和25nm比色。因?yàn)槊浪{(lán)吸收峰小組長為650nm，伊紅吸收峰波長為525nm；天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍(lán)的一半。

所以新配染料rA接近2，隨著美藍(lán)逐漸氧化為天青B，RA也相應(yīng)下降。RA下降到1.3±0.1時(shí)即可使用。瑞特染色劑貯存過程中，必須塞嚴(yán)，以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸。有人主張?jiān)谂浞街屑尤敫视?0ml，防止甲醇揮發(fā)，關(guān)可合細(xì)胞染色清晰。甲醇必須純凈，如甲醇中丙酮含量過多，染色偏酸，使白細(xì)胞著色不良。

瑞特染色劑

應(yīng)用^[3]

瑞特染色劑對細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。

瑞特染色劑中，PH對細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均不蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅；在偏酸性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經(jīng)片必須清潔，無酸堿污染。配制瑞特染色劑必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋瑞特染色劑必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，以致識別困難，甚至造成錯(cuò)誤。

為發(fā)觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細(xì)胞及其異常變化，血涂片必須嘲行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來的。目前常用瑞特染色法。顯微鏡涂片用染色劑，如血、骨髓的染色，血液中寄生蟲染色(原蟲、利什曼原蟲、血絲蟲等)。生物染色。顯微鏡涂片用染色劑，如血、骨髓的染色、血液中寄生蟲染色(原蟲、利什曼原蟲、血絲蟲等)。

使用方法^[2]

1、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片或細(xì)菌涂片，待涂片自然干燥。

2、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3、滴加適量瑞氏色素覆蓋涂片，室溫染色 1～2min。

4、涂片滴加等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動玻片或采用其他方式混合，使磷酸鹽緩沖液與瑞氏色素混勻，室溫靜置 3～10min。

5、用自來水或蒸餾水從玻片一端輕輕沖洗。(注:也可先用磷酸鹽緩沖液沖洗玻片，時(shí)間控制在 30s左右。)

6、干燥。

7、鏡檢:先用低倍鏡觀察血涂片，再用油鏡。。

主要參考資料

[1]周愛民. (2012). 瑞特染色法白帶涂片技術(shù)的應(yīng)用. 中國保健營養(yǎng)旬刊(10), 499-500.

[2] 楊頡, 孟冬梅, 宋文斌, 孫曉玲, & 陳兵. (2007). 巨核細(xì)胞酶標(biāo)染色法在貧血鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值. 臨床血液學(xué)雜志, 20(2), 96-98.

[3] 李敏, 劉航, 徐智芳, 劉向榮, 王洋, & 饒青等. (2008). 白血病細(xì)胞系中抑癌基因pten啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)檢測及其去甲基化研究. 中華血液學(xué)雜志, 29(5), 289-292.