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對(duì)甲氨基苯酚硫酸鹽又叫4-(甲氨基)苯酚硫酸鹽，可用于制備一種次氯酸熒光探針。次氯酸是由Cl-和H2O2在生物系統(tǒng)中的髓過氧化物酶(髓過氧化物酶)作用下產(chǎn)生的一種重要的活性氧。盡管次氯酸在生物系統(tǒng)中濃度極低，但在免疫防御中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。然而，由于次氯酸的高反應(yīng)性，過量的次氯酸可引起一系列與炎癥密切相關(guān)的疾病。因此，建立一種滿意的檢測(cè)方法用于檢測(cè)活細(xì)胞和活體中天然次氯酸具有十分重要的意義。
步驟1：分別將對(duì)甲氨基苯酚硫酸鹽2.07g(6mmol)，叔丁基二甲基氯硅烷1.09g(7.2mmol)和咪唑1.6g(24mmol)加入到50ml的圓底燒瓶中，并加入20ml二氯甲烷作為溶劑，在室溫下攪拌并采用TLC監(jiān)測(cè)。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液用飽和食鹽水洗三遍，無水硫酸鈉干燥1h，抽濾并減壓除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，然后經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚＝1：40)后，得到4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N-甲基苯胺，即化合物4，1.28g，產(chǎn)率為90％。
步驟2：將950mg(4mmol)的化合物4，6-溴-2萘甲醛470mg(2mmol)，1,1′-聯(lián)萘-2,2′-雙二苯膦75mg(0.12mmol)，醋酸鈀22.4mg(0.1mmol)，碳酸銫2.6g(8mmol)，加入到裝有回流裝置的雙口瓶中，除氧，在氬氣條件下通入干的甲苯溶液作為溶劑，回流反應(yīng)3h，TLC監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完成后減壓除去部分溶劑，混合液再用二氯甲烷溶解，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾并通過減壓除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚＝1:20)，得到6-((4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)(甲基)氨基)-2-萘甲醛，即化合物3，728mg，產(chǎn)率93％。
步驟3：將391mg(1mmol)的化合物3加入到25ml的圓底燒瓶中，加入10ml四氫呋喃溶液作為溶劑，再加入3ml(3mmol)TBAF(四丁基氟化銨)，室溫下攪拌30min，通過TLC監(jiān)測(cè)，反應(yīng)液通過減壓除去溶劑，再加入二氯甲烷溶解，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾并通過減壓除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，然后經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯：石油醚：1:10)得到6-((4-羥基苯基)(甲基)氨基)-2-萘甲醛，即化合物2，213mg，產(chǎn)率59％。
步驟4：將139mg(0.5mmol)化合物2加入到10ml圓底燒瓶中，加入8ml二氯甲烷溶液作為溶劑，氬氣條件下，加入69ul(1mmol)二巰基乙醇，9ul(0.05mmol)三氟甲磺酸三甲基硅酯,室溫下攪拌1h，TLC監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完成后，反應(yīng)液用和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾并通過減壓除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯：石油醚：1:10)得到4-(((6-(1，3-氧雜環(huán)戊烷-2-基)環(huán)烷-2-基)(甲基)氨基)苯酚，即次氯酸熒光探針分子1。
[1] [中國發(fā)明] CN201910403158.6 一種次氯酸熒光探針及其制備方法