302-95-4 / 脫氧膽酸鈉的合成方法及在助劑方面的應(yīng)用

背景及概述^[1]

脫氧膽酸鈉是脫氧膽酸的鈉鹽，常溫下為白色結(jié)晶性粉末，類似膽汁氣味，有強(qiáng)烈苦味。脫氧膽酸鈉屬于離子型去污劑，可用于裂解細(xì)胞和溶解難溶于水的蛋白質(zhì)。亦可用于膽汁溶菌實驗，其原理是膽汁或膽鹽具有表面活性，可快速激活自溶酶，加速了肺炎鏈球菌等細(xì)菌的自身溶解。脫氧膽酸鈉屬于膽汁酸類化合物，膽汁酸類化合物的特征在于兩個連接單元，即剛性類固醇核和脂肪族短側(cè)鏈，電離基團(tuán)可存在于核或側(cè)鏈上，偶合基團(tuán)可存在于核上（如硫酸根、葡萄糖醛酸酯、磷酸根）或存在于側(cè)鏈上（甘氨酸或牛磺酸或其它氨基酸甚至糖類），側(cè)鏈結(jié)構(gòu)決定了化合物的種類（膽酸或膽酸鹽）。其結(jié)構(gòu)如下圖所示。

人體中所發(fā)現(xiàn)的最主要的膽汁酸是鵝脫氧膽酸和脫氧膽酸，主要作用是乳化脂肪以供在腸中吸收。膽酸、脫氧膽酸及其鹽在注入活體內(nèi)脂肪沉積處時具有脂肪去除性質(zhì)。注入脂肪組織的脫氧膽酸鹽經(jīng)由細(xì)胞溶解機(jī)理降解脂肪細(xì)胞，因為注入脂肪的脫氧膽酸鹽因暴露于蛋白質(zhì)而快速失活，接著快速返回到腸內(nèi)容物，所以其作用受空間限制。作為賦予臨床安全性的此減弱作用的結(jié)果，脂肪去除療法通常需要4-6個療程。此無需外科手術(shù)的局部脂肪去除不僅有利于與病理學(xué)局部脂肪沉積（例如HIV治療中的醫(yī)學(xué)介入易發(fā)的血脂異常）相關(guān)的治療性處理，而且有利于美容脂肪去除且無外科手術(shù)所伴隨的風(fēng)險。羅坦達(dá)指出脫氧膽酸鈉的清潔作用是用于局部脂肪溶解的可注射磷脂酰膽堿調(diào)配物的主要特征。

合成方法^[1]

以9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮（化合物25）為起始原料，氫化、提純后,得化合物26，惰性氣氛下向化合物26的DCM溶液中添加硫酸，攪拌，反應(yīng)完全后洗滌、真空蒸餾，得灰白色固體化合物27，在-40℃至-45℃惰性氣氛下，向化合物27的THF溶液中加入三叔丁基氧氫化鋁鋰，攪拌反應(yīng)完全后，添加HCl溶液淬滅反應(yīng)混合物，分離各相并萃取水層，洗滌、蒸發(fā)，得化合物28。向溴化乙基三苯基膦的THF溶液中逐滴添加叔丁醇鉀，攪拌1h后向體系中加入化合物28，使反應(yīng)完全，冰水淬滅，MTBE萃取水層，洗滌并合并有機(jī)萃取物，真空濃縮有機(jī)層，MTBE純化粗物質(zhì)，過濾，蒸餾，制備出化合物29，加入三乙胺、DMAP和乙酸酐，反應(yīng)得化合物30，經(jīng)由化合物84或85轉(zhuǎn)化為化合物32，向化合物32的乙酸乙酯溶液中添加TBHP水溶液，0℃下緩慢添加次氯酸鈉，攪拌反應(yīng)，分離并萃取，合并有機(jī)層，亞硫酸鈉溶液處理2h后用氯鉻酸吡啶鎓處理有機(jī)層，洗滌并蒸發(fā)有機(jī)層，純化得淺黃色固體狀化合物24，用Pd/C氫化還原環(huán)上的雙鍵，并用三叔丁氧基氫化鋁鋰還原羰基得到化合物34，堿性條件下水解得脫氧膽酸粗品，純化即制得脫氧膽酸，NaOH堿化制得脫氧膽酸鈉。其合成路線如下圖所示。

應(yīng)用領(lǐng)域^[2][3]

1.吸收促進(jìn)劑

使用脫氧膽酸鈉作透皮促進(jìn)吸收劑制備人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子噴霧劑，兼顧穩(wěn)定劑和吸收促進(jìn)劑的雙重功能，既對主藥起到抗氧增效的穩(wěn)定劑作用，又起到促進(jìn)主藥透皮膚吸收的作用，對生物膜或皮膚無任何破壞作用，能夠充分提高主藥機(jī)體的局部或全身的生物利用度，并可被機(jī)體生物降解。其制備過程如下：

（1）將蔗糖與丙二醇作為復(fù)合穩(wěn)定劑用醋酸鹽緩沖液溶解，配制成含蔗糖10%、丙二醇10%母液作為配制母液I；

（2）將脫氧膽酸鈉作為吸收促進(jìn)劑用醋酸鹽緩沖溶液溶解，配制成含0.5%脫氧膽酸鈉的母液II；

（3）取100ml母液I，然后加入67ml的GM-CSF原液，混勻后室溫放置30min；

（4）加入母液II，再用醋酸鹽緩沖液定容到1000ml；

（5）用0.22μm的無菌微孔濾膜除菌過濾后分裝。配方如下表所示。

2.表面活性劑

脫氧膽酸鈉是一種重要的陰離子表面活性劑。采用生物相容性較好的卵磷脂作為外層包裹材料，脫氧膽酸鈉作為表面活性劑進(jìn)行乳化，得到表面具有負(fù)電荷的水溶性較好的全氟溴辛烷-脂質(zhì)體納米球。具體步驟為：

（1）取卵磷脂0.1g，PFOB 60 μL，充分溶解在二氯甲烷中，得到溶液A；

（2）向A溶液中加入1.5%脫氧膽酸鈉溶液20ml，超聲分散2min，磁力攪拌3好，得到溶液B；

（3）將溶液B離心10000rpm，5min，棄去上清液，加入去離子水充分分散沉淀，室溫保存。制備的脂質(zhì)體納米微球電鏡圖如下。

主要參考資料

[1] 羅伯特·M·莫里亞蒂，約翰·格雷戈里·里德，羅伊·A·小斯瓦爾林根，脫氧膽酸的純化方法，CN 201710119383，申請日2010-12-17

[2] 王玉清，吳歧，一種人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子噴霧劑及其制備方法，CN 200510103201，申請日2005-09-16

[3] 張華娟，朱君，何丹農(nóng)，一種水溶性全氟溴辛烷-脂質(zhì)體納米微球及其制備方法，申CN 201310607899，請日2013-11-27