9004-06-2 / 彈性蛋白酶的提取方法

彈性蛋白酶，廣泛存在于哺乳動物胰臟，彈性蛋白酶的水解機(jī)制，是首先使彈性蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)變疏松并溶解，對甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)殘基有很高的水解，將已溶解的彈性蛋白質(zhì)降解成可溶的多肽及氨基酸。

用途

胰彈性酶原合成于胰臟的腺泡組織，經(jīng)胰蛋白酶或腸激酶激活后才成為活性酶。人胰每克含0.3-6.2單位彈性酶，牛、豬胰彈性酶含量大約高5倍。

彈性蛋白酶經(jīng)濟(jì)價值極高，在醫(yī)藥方面主要作為治療藥物:

(I)治療高血脂癥:(2)防治動脈粥樣硬化:(3)抑制脂肪肝發(fā)展:(4)治療慢性氣管炎及其它結(jié)締組織纖維增生性疾病:(5)外用于消除皮膚焦痂、碎肩，用于燒傷患者的治療以及皮膚潰瘍、口腔潰瘍等癥。

提取方法

藥用的彈性蛋白酶主要從豬胰臟中提取，目前，我們通過檢索發(fā)現(xiàn)彈性蛋白酶的提取分離技術(shù)多采用離子交換樹脂從胰臟提取液分離精制而得，如南昌市浩然生物醫(yī)藥有限公司公開了《從豬胰臟中提取純化彈性蛋白酶》專利(申請?zhí)?200810107092.8)，常州千紅生化制藥有限公司純化彈性蛋白酶的方法(申請?zhí)?200710020819.4)專利，均采用樹脂進(jìn)行純化，樹脂的價格昂貴，使大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)成本高。

而本發(fā)明是靈活運用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸緩沖液鹽溶、硫酸銨鹽析等現(xiàn)代蛋白純化技術(shù)，使用磷酸鹽、丙酮、硫酸銨等價格便宜的輔料，制備彈性蛋白酶，不僅在一定程度上降低了成本，且產(chǎn)品的收率也能達(dá)到15萬單位/kg胰臟。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是從合格的動物胰臟中提取彈性蛋白酶。

本發(fā)明的技術(shù)方案是:將合格的動物胰臟經(jīng)過絞碎后，靈活運用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸緩沖液提純及硫酸銨鹽析結(jié)晶等現(xiàn)代蛋白純化技術(shù)，制備彈性蛋白酶的方法。本發(fā)明操作簡單、成本低，非常適合于規(guī)?；笊a(chǎn)。包括如下步驟:

(I)水解:將新鮮或冷凍豬胰臟絞碎置于容器中，加入2?5倍量(TC以下的丙酮，在O°C左右攪拌脫水0.5?1.5小時，離心得沉淀物，加入0.5?1.5倍量的水及0.01?0.02倍量胰酶攪拌溶解，用6%?10 %氫氧化鈉溶液調(diào)至pH值至6.0?9.0，于15°C?25°C保溫攪拌I?3小時，再加入娃藻土充分?jǐn)嚢?，過濾。

(2)沉淀:收集濾液與1.5?3倍量丙酮攪勻，靜置10?14小時，虹吸棄去上層丙酮清液，用1.5?2倍量丙酮分3?4次洗滌沉淀物，過濾甩干，干燥，即得彈性蛋白酶粗品。

(3)提純:將粗品與45?60倍量磷酸緩沖液攪拌0.5?1.5小時，于15°C?25°C靜置15?25小時，按照溶液的體積加入其量約3%?7%的硅藻土拌勻，過濾;往濾液中加入硫酸錢，至硫酸錢濃度達(dá)35%?45%。過濾，得鹽析物;將鹽析物再按Ig: 8?1ml的比例溶于碳酸緩沖液，然后在攪拌下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，直至微渾，O °C?8 °C下靜置48?72小時，慢慢形成針狀結(jié)晶，過濾。

(4)干燥:濾取晶體并用水沖洗3?5次，冷凍干燥，即可得彈性蛋白酶。