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煙酰胺腺嘌呤二核苷酸又稱輔酶Ⅰ。脫氫酶輔酶的一種。為煙酰胺核苷酸與腺嘌呤核苷酸的縮合物，存在氧化型和還原型兩種形式，分別簡寫成NAD+和NADH+H+。含有維生素B5，其煙酰胺吡啶環(huán)在反應中可以可逆地進行脫氫和得氫(或得失電子)作用。為一些不需氧脫氫酶的輔酶，在生物體內起傳遞氫的作用。煙酰胺腺嘌呤二核苷酸主要存在于酵母細胞線粒體中，目前通常選用破壁和提純的方法制備煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，常用的破壁方法有溫差法(熱處理法)和高壓均漿法，溫差法破壁效果不理想，高壓均漿法不適合工業(yè)化大生產，常用的提純方法為柱洗脫，但是柱洗脫過程繁瑣，耗時長，不利于工業(yè)化生產，溶劑使用量大，污染環(huán)境，制得的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸純度低，收率低。因此需要提供一種新的制備方法。
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸參與細胞物質代謝、能量合成、細胞DNA修復等多種生理活動，對機體免疫能力有重要作用。在健康狀態(tài)下，人體內煙酰胺腺嘌呤二核苷酸濃度穩(wěn)定，維持各項細胞正常功能。體內的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸濃度決定了細胞衰老的過程和程度，濃度下降會加速細胞衰老的過程。
研究表明，NAD+對缺血手術引起的腎臟梗死具有保護作用，可以顯著減少血清中尿素氮、肌酐水平；NAD+對缺血手術引起的腎小管損傷具有保護作用。NAD+(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，Nicotinamideadeninedinucleotide，簡稱NAD+)可以有效保護腎臟缺血引起的腎臟損傷，NAD+在制備防治腎臟缺血性損傷藥物中有重要應用價值。
另外，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在制備治療炎性痛藥物中具有一定的應用，NAD+通過依賴NAD+的去乙酰化酶SIRT1和SIRT2參與調節(jié)福爾馬林和完全弗氏佐劑(CFA)誘發(fā)的炎癥痛，而SIRT1和SIRT2通過不同機制參與NAD+對炎癥痛的抑制作用，從而達到對炎性痛具有鎮(zhèn)痛的作用。煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在制備防治化療藥物鹽酸阿霉素誘導的肝臟損傷藥物中也具有的應用，NAD+不但可以有效防治化療藥物鹽酸阿霉素造成的肝臟損傷，而且我們還發(fā)現NAD+可以有效殺死神經膠質腫瘤細胞、神經元腫瘤細胞、胃癌腫瘤細胞、腎癌腫瘤細胞或乳腺癌腫瘤細胞，對于正常原代細胞沒有殺傷作用。
一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的制備方法，包括如下步驟：
S1、破碎細胞：將酵母細胞加入質量分數為0.04wt％鹽酸水溶液中浸泡2.5h，進行溫差破壁處理后，用孔徑為40nm的陶瓷膜過濾，取濾液得到清液A，其中，酵母細胞和鹽酸水溶液的重量體積(g/ml)比為5：16；
S2、濃縮：取S1中得到的清液A超濾，取超濾液納濾得到濃縮液B，用鹽酸水溶液調節(jié)濃縮液B的pH＝2.5得到濃縮液C，其中，超濾膜的截留分子量為4000D，納濾膜為聚醚砜膜，納濾膜的截留分子量為300D；
S3、洗脫：將S2中得到的濃縮液C過D152樹脂柱，用濃度為0.1mol/l的氨水洗脫，收集洗脫液D，用核酸蛋白檢測儀檢測洗脫液D至核酸蛋白檢測儀讀數為570時停止洗脫，用鹽酸水溶液調節(jié)洗脫液D的pH＝7后，過717樹脂柱，用濃度為0.3mol/l的氯化鉀水溶液洗脫，收集得到綜合液E，用核酸蛋白檢測儀檢測綜合液E至核酸蛋白檢測儀讀數為≤200時停止洗脫；
S4、分離：將S3中得到的綜合液E納濾得到濃縮液F；用硝酸水溶液調節(jié)濃縮液F的pH＝1，加丙酮沉淀，離心得到固體G，其中，納濾膜為聚醚砜膜，納濾膜的截留分子量為300D，濃縮液F和丙酮的重量比為1：4；
S5、純化：將S4中得到固體G加水溶解，過固定相為改性硅膠的制備色譜，脫鹽，分離，收集分離液，濃縮，凍干得到煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，其中，固體G和水的重量體積(g/ml)比為2：5，脫鹽時用質量分數為1wt％甲醇水溶液以30ml/mim的速度洗滌，其中，固體G、甲醇水溶液的重量體積(g/ml)比為1：80，分離時用30min內，質量分數由3wt％勻速增至10wt％的甲醇水溶液梯度洗脫，其中，洗脫速度為30ml/min，2g的固體G所用洗脫時間為30min。
[1] 農業(yè)大詞典
[2] CN201511022464.3一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的制備方法
[3] CN201710064412.5煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在制備預防或治療腎臟缺血性損傷藥物中的應用
[4] CN201710469665.0煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在制備治療炎性痛藥物中的應用
[5] CN201210252579.1煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在制備防治化療藥物鹽酸阿霉素誘導的肝臟損傷藥物中的應用