43043-74-9 / 去氧紫草素的含量

背景及概述^[1]

紫草藥材中的萘醌類(lèi)是主要的有效成分，含量約占3%～6. 5%。文獻(xiàn)報(bào)道在新疆紫草中得到的萘醌類(lèi)化合物，包括去氧紫草素、紫草素、β-羥基戊酰紫草素、β-二甲基丙烯酰紫草素、β-羥基異戊酰阿卡寧、乙酰紫草，其中，乙酰紫草醌、紫草醌、去氧紫草素等萘醌類(lèi)色素為紫草藥材的主要有效成分。

含量測(cè)定^[1]

1 儀器與試劑

1. 1 儀器

Waterse2695 高效液相色譜儀，Waters2998 二極管陣列檢測(cè)器； KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)；電子天平FR224CN(上海奧豪斯儀器有限公司制造)；電熱恒溫水浴鍋HH. SY11-NY2C(北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司)；SHBIII 循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司) 。

1. 2 材料與試劑

去氧紫草素對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司 B21034-10MG)； 山東紫草、 安徽紫草和新疆紫草(藥店購(gòu)買(mǎi)，經(jīng)段瑞老師鑒定)；乙腈色譜純(天津永大試劑有限公司)；甲醇色譜純(天津永大試劑有限公司) 。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2. 1 溶液配制

2. 1. 1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取去氧紫草素的對(duì)照品1 mg，置 10 ml 的容量瓶中，用甲醇溶解，

稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為 0. 1 mg/ml 的對(duì)照品溶液，置陰涼干燥處，避光環(huán)境保存。

2. 1. 2 供試品溶液的制備

將干燥紫草藥材粉碎，過(guò) 60 目篩， 精密稱(chēng)取紫草藥材粉末1. 0 g，置于 50

ml 的錐形瓶中，加入甲醇 25 ml，超聲提取30 min，振搖后靜置冷卻約10 min，濾過(guò)，濾渣加20 ml 的甲醇，超聲提取20 min，合并甲醇濾液并定容至50 ml，置40 ℃恒溫水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?5 ml，用0. 45μm的微孔濾膜過(guò)濾， 既得供試品溶液。

2. 2 方法學(xué)考察和樣品測(cè)定

2. 2. 1 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱: Symmetry C18 BDS 柱(250 mm×4. 6 mm，5μm)； 流動(dòng)相:乙腈∶水( 80∶20)；流速: 1. 0 ml/min； 檢測(cè)波長(zhǎng): 265 nm；柱溫: 35 ℃；進(jìn)樣量: 20 μl； 檢測(cè)時(shí)間: 30min。在此色譜條件下，去氧紫草素的理論塔板數(shù)大于5000，與相鄰色譜峰分離度大于 1. 7，對(duì)稱(chēng)因子為1. 06。

2. 2. 2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取空白溶液、對(duì)照品溶液、三個(gè)產(chǎn)地的供試品溶液適量，按“2. 2. 1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖(圖1)。由圖 1 可見(jiàn)，空白溶液色譜在對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置無(wú)吸收峰，表明在該試驗(yàn)條件下其他組分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，專(zhuān)屬性較好。

2. 2.3 線性關(guān)系的考察

精密量取去氧紫草素對(duì)照品溶液(0. 1 mg /ml) 各1. 0 ml、2. 0 ml、3. 0 ml、 4. 0ml、5. 0 ml，分別置于 10 ml 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成10. 0μg /ml、20. 0μg /ml、30. 0 μg/ml、40. 0μg /ml、50. 0 μg /ml 的溶液，分別取各溶液20μl 進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析。以對(duì)照品濃度(μg /ml) 為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸計(jì)算可得線性回歸方程為: Y = 34769X－62579，r = 0. 9994， 表明去氧紫草素在 10. 00～50. 00μɡ/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2. 2. 4 精密度試驗(yàn)

取線性關(guān)系項(xiàng)下取配好的去氧紫草素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄在 265 nm處去氧紫草素的色譜圖，以峰面積計(jì)算，RSD 值為0. 31% ，表明儀器的精密度良好。

2. 2. 5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱(chēng)取三個(gè)產(chǎn)地的紫草粉末，按“2. 1. 2” 項(xiàng)下的方法制備供試品溶液， 按“2. 2. 1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，分別在 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10h 不同時(shí)間段內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣三次，每次進(jìn)樣 20μl，記錄去氧紫草素的峰面積，計(jì)算其含量，RSD 分別為安徽 0. 10% ，新疆 0. 07%，山東 0. 06% ，表明三個(gè)產(chǎn)地去氧紫草素在 10 h 內(nèi)較穩(wěn)定。

2. 2. 6 重復(fù)性試驗(yàn)

分別取山東、新疆、安徽產(chǎn)地的紫草粉末，按“2. 1. 2” 項(xiàng)下的方法分別制備供試品溶液并處理成6份，依次進(jìn)樣每次20μl，平行測(cè)定 6次，計(jì)算去氧紫草素的百分含量分別為山東71. 40% ，新疆 67. 83%，安徽134. 37%，RSD 值分別為0. 04%，0. 10%，0. 58% 。表明方法重復(fù)性較好。

2. 2. 7 回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確量取已知含量的安徽供試品溶液共 9 份，每份 1 ml，分別精密加入去氧紫草素對(duì)照品適量( 約相當(dāng)于安徽紫草中去氧紫草素含量的 80%，100%，120% )，置于 5 ml 的容量瓶。實(shí)驗(yàn)分為三組，每組分為 3 份。按“2. 2. 1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣 20μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算去氧紫草素的含量。測(cè)得低、中、高三個(gè)不同濃度的平均加樣回收率分別為 100. 17%， 112. 82%， 125. 28%， 9 個(gè)加樣回收率數(shù)據(jù)的RSD 值 0. 10%，在誤差允許的范圍內(nèi)。

2. 2. 8 樣品的含量測(cè)定

分別稱(chēng)取山東、新疆和安徽紫草粉末，按“2. 1. 2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各處理成3 份，按“2. 2. 1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，山東、新疆、安徽紫草中去氧紫草素的百分含量分別為 71. 42% 、67. 77% 、135. 32%，RSD 分別為0. 02%、0. 04%、0. 04% 。其結(jié)果見(jiàn)表 1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的紫草中去氧紫草素的含量存在差別。

主要參考資料

[1]朱永樂(lè),董娜,曲曉蘭,齊永秀.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地紫草中去氧紫草素的含量[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2017,38(11):1229-1231.