ELISA試劑盒實驗常見問題盤點

在進行ELISA實驗過程中也會經(jīng)常遇到一些問題，這些問題會阻礙我們實驗進程，了解ELISA實驗常見問題有助于提高實驗的效率，上海紀(jì)寧為大家整理了ELISA試劑盒常見的問題

通蔚elisa試劑盒

Elisa常見問題

1.樣品如何保存？

我們始終建議盡可能使用新鮮樣品（通常這些樣品會產(chǎn)生最佳結(jié)果）?；蛘?，樣品可以儲存在–20°C、–80°C或液氮中（取決于樣品）。

2.是否可以使用試劑盒說明書中未推薦的樣本類型？

大多數(shù)情況下是的，只要預(yù)期濃度在試劑盒的范圍內(nèi)（理想情況下應(yīng)該是中間范圍）。需要注意的是，說明書中提到的樣品類型已經(jīng)過驗證，并確認(rèn)在指定條件下有效。其他樣品類型尚未經(jīng)過測試，因此無法保證它們是否有效。

3.試劑盒的保存溫度是多少？

試劑盒的推薦儲存溫度通常為2-8°C。但是，試劑盒中的某些試劑可能需要在-20°C下儲存。務(wù)必按照說明書對所有試劑正確儲存條件，這將確保試劑盒發(fā)揮最佳性能。

4.必須遵循ELISA說明書進行實驗嗎？

試劑盒都經(jīng)過精心優(yōu)化，隨意更改其中的參數(shù)（例如孵育時間、溫度、試劑濃度等）都會影響抗原抗體反應(yīng)、顯色反應(yīng)等，最終影響實驗結(jié)果。

5、其它試劑可以應(yīng)用本試劑盒實驗嗎？

ELISA試劑盒是一個經(jīng)過精心匹配和優(yōu)化的系統(tǒng)，各個組分之間相互協(xié)調(diào)才能保證實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。除非試劑盒說明書明確允許使用某些替代試劑，否則強烈建議使用試劑盒提供的全部組分，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

6.可使用的樣品量和濃度是多少？

樣品體積通常在50-100μl之間，但這可能因檢測而異。建議將樣品稀釋至試劑盒的中間范圍，以獲得最佳結(jié)果。此外，請注意，接近范圍下限的低濃度可能無法準(zhǔn)確檢測，因為已知ELISA檢測的范圍會隨著時間的推移而丟失，或者如果試劑盒沒有適當(dāng)保存。請勿改變說明書中推薦的樣品體積，因為這些體積是為實現(xiàn)最佳性能而設(shè)計的。相反，建議使用更稀釋或更濃縮的樣品。

7.如何處理產(chǎn)生的值超出分析動態(tài)范圍的樣本？

產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)的樣本需要使用更高的稀釋倍數(shù)重復(fù)。對于低于檢測范圍的樣本值，這些值被視為不可檢測。標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之外的值通常是非線性的，由于此特性，無法使用此曲線正確推斷出值。我們建議僅使用在檢測動態(tài)范圍內(nèi)的樣本值。

8.是否需要同時運行所有樣本？

不是，因為大多數(shù)試劑盒都使用條狀微孔板，因此每次只能使用單個條狀微孔板，可用于在不同時間分析不同數(shù)量的樣品。

9.每次都要進行空白和標(biāo)準(zhǔn)檢測嗎？

是的，因為這些值是計算樣品濃度和再現(xiàn)性所必需的。這很重要，因為它可以反映出每次測定和每天的性能變化。

10.是否需要運行重復(fù)樣本和標(biāo)準(zhǔn)？

是的，這對于監(jiān)測檢測的精確度很重要，并能提高檢測結(jié)果的可信度。我們建議至少進行重復(fù)實驗，但最好進行三次（或更多）。

11.如何獲得可重復(fù)的結(jié)果？

孵育時間、溫度、操作者、所用清洗和移液技術(shù)以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導(dǎo)致產(chǎn)生許多差異。這些會直接影響所獲得的結(jié)果，因此強烈建議每個用戶都獲得自己的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

12.標(biāo)準(zhǔn)工作正常，但沒有樣品信號？

這可能由多種原因造成。簡單的事實可能是樣品可能不包含您認(rèn)為正在測試的分析物。未正確遵循建議的稀釋度，樣品過度稀釋可能導(dǎo)致其低于標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，從而無法檢測到。也可能存在基質(zhì)效應(yīng)，這可能會掩蓋檢測。

13.什么是樣品基質(zhì)效應(yīng)？

大多數(shù)生物樣本由多種不同蛋白質(zhì)和鹽的復(fù)雜混合物組成。眾所周知，這些溶解成分的存在會降低抗原和抗體的結(jié)合能力。這導(dǎo)致建立終點結(jié)合或平衡條件所需的時間大大增加。由于樣本中存在IgG的非特異性結(jié)合相互作用，也會產(chǎn)生假信號。樣本稀釋緩沖液的配方可用于降低與基質(zhì)效應(yīng)相關(guān)的測定背景噪音，并最大限度地減少IgG的非特異性結(jié)合，從而有助于優(yōu)化測定信號。僅出于這個原因，許多樣本可能需要稀釋才能落入測定的功能范圍內(nèi)。

14.需要使用？

強烈推薦這種方法，因為眾所周知，與使用振蕩器相比，獲得的OD值通常要低得多。

15.建議按照哪些流程進行清洗步驟？

手動和自動清洗程序都是可行的選擇。我們建議定期進行校準(zhǔn)，并在清洗前沖洗系統(tǒng)。還必須小心吸干板子時使用的所有內(nèi)容物和無絨紙。

16.如果已經(jīng)提取了樣本，建議的稀釋度是多少？

在這種情況下，建議不要遵循試劑盒手冊中推薦的稀釋度，因為提取程序后所需的樣品稀釋量將受到提取和純化步驟的影響。濃縮或稀釋的量需要由最終用戶決定。

17.波長校正是如何進行的？

板讀取器必須設(shè)置為450nm，如果波長校正可用，則需要將其設(shè)置為540nm或570nm。此減法將糾正板中可能存在的任何光學(xué)缺陷。但是，如果讀取器中沒有此功能，則需要從450nm的讀數(shù)中減去540nm或570nm的讀數(shù)。進行雙波長讀數(shù)的主要原因是為了校正可能由塑料孔、燈或任何其他光學(xué)波動引起的光密度。如果僅直接在450nm下讀數(shù)而不進行任何校正，則可能導(dǎo)致獲得的結(jié)果更高且更不準(zhǔn)確。