在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)中，包被是實(shí)驗(yàn)的第一步，良好的包被可以確保后續(xù)的免疫識(shí)別和信號(hào)輸出步驟順利進(jìn)行。接下來，上海紀(jì)寧生物將為大家介紹ELISA試劑盒的包被原理，了解包被原理有助于ELISA實(shí)驗(yàn)順利展開。
目錄
什么是ELISA包被
ELISA包被是將特定的抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面上的過程，這一過程也被稱為固相化。包被的目的是將待檢測(cè)物質(zhì)（抗原或抗體）固定在固相載體表面上，使其能夠捕捉和結(jié)合溶液中的目標(biāo)分子，為后續(xù)反應(yīng)提供基礎(chǔ)。
ELISA包被原理
包被原理是主要是利于抗原抗體之間的特異性結(jié)合，以及蛋白質(zhì)與固體載體（微孔板）之間的物理吸附（如疏水作用，范德華力等）。其原理如下：
1、靜電作用。蛋白質(zhì)表面帶有不同電荷（如正電荷和負(fù)電荷），在適當(dāng)PH環(huán)境下可以與微孔板表面電荷發(fā)生靜電吸附。這種吸附在一定的條件下具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，便于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。
2、疏水作用。蛋白質(zhì)與固相載體（如塑料微孔板）表面通常具有一定的疏水性，因此在合適的條件下會(huì)自發(fā)的吸附在載體表面上。疏水作用是一種較弱的相互作用，但在常規(guī)的ELISA包被中已足夠?qū)⒖乖蚩贵w固定在微孔板表面。
3、氫鍵和范德華力。在包被過程中，蛋白質(zhì)分子與載體之間還會(huì)通過氫鍵和范德華力進(jìn)一步增強(qiáng)吸附穩(wěn)定性，這有助于抗原或抗體有效結(jié)合。
ELISA包被步驟
1.將抗原或抗體按照說明書進(jìn)行稀釋，加入一定量的包被液，混合均勻。
2.將稀釋后的抗原或抗體加入酶標(biāo)板中，每孔加入100μL，輕輕搖晃酶標(biāo)板，使抗原或抗體均勻分布。
3.將酶標(biāo)板放入濕盒中，4℃孵育一定時(shí)間（一般為1-2小時(shí)），使抗原或抗體與酶標(biāo)板充分結(jié)合。
4.孵育結(jié)束后，用洗滌液清洗酶標(biāo)板，每次清洗3-5分鐘，共清洗3-5次，以去除未結(jié)合的抗原或抗體。
5.在洗滌完成后，加入一定量的底物溶液，輕輕搖晃酶標(biāo)板，使底物溶液充分覆蓋酶標(biāo)板上的抗原或抗體。
6.將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育一定時(shí)間（一般為15-30分鐘），使底物溶液與抗原或抗體充分反應(yīng)。
7.孵育結(jié)束后，用終止液終止反應(yīng)，每孔加入100μL，輕輕搖晃酶標(biāo)板，使終止液充分覆蓋酶標(biāo)板上的底物溶液。
8.用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的光密度值（OD值），記錄數(shù)據(jù)并進(jìn)行后續(xù)分析。
ELISA包被注意事項(xiàng)
1、確定合適的包被抗原/抗體濃度
包被抗原濃度是比較重要的，過低或過高都會(huì)影響后續(xù)檢測(cè)，確定合適的包被抗原/抗體濃度至關(guān)重要。在進(jìn)行包被實(shí)驗(yàn)之前可以詳細(xì)參考說明書選擇合適濃度的包被溶液。一般包被濃度為1-10μg/mL，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的靈敏度需求進(jìn)行優(yōu)化。
2、包被后洗滌步驟要徹底
包被洗滌不充分，殘留的未結(jié)合的抗原/抗體會(huì)導(dǎo)致后續(xù)步驟中出現(xiàn)背景信號(hào)高、影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。建議使用洗滌液反復(fù)沖洗3-5次，每次盡量排干液體，確保充分洗滌。
上述為大家介紹了ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中包被原理，通過了解上述ELISA包被原理，你也可以不被ELISA包被所困擾。也歡迎您了解紀(jì)寧ELISA試劑盒，我們?yōu)榭蒲刑峁└咛禺愋?、高靈敏ELISA試劑盒，助力您科研。
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