細(xì)胞冷凍保存是生物研究工作流程中一個重要組成部分。在低溫下，活細(xì)胞中的生物和化學(xué)反應(yīng)會大大減少，這一現(xiàn)象被廣泛用于長期儲存細(xì)胞和組織。接下來上海紀(jì)寧生物為您介紹：

  1、什么是細(xì)胞凍存

  2、細(xì)胞凍存步驟

  3、細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)

  細(xì)胞凍存是利用低溫保存細(xì)胞和組織以備將來使用的過程。該技術(shù)涉及將細(xì)胞冷卻到極低溫度（-80?C至-196?C）并暫停其細(xì)胞代謝，從而無限期地保存細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的水結(jié)冰時，冰的形成會導(dǎo)致溶質(zhì)失衡并破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。通過使用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和含有適當(dāng)冷凍保護(hù)劑和添加劑的冷凍介質(zhì)，研究人員可以最大限度地提高細(xì)胞解凍后的細(xì)胞活力，以供細(xì)胞培養(yǎng)。

  1.制備細(xì)胞凍存液:應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的配方，常用的凍存液配方包括：10%DMSO+90%胎牛血清(FBS)或10%DMSO+90%細(xì)胞培養(yǎng)基。凍存液配制好后，應(yīng)進(jìn)行過濾除菌或在無菌條件下操作，并分裝保存，避免反復(fù)凍融。

  2.收集和處理細(xì)胞:取形態(tài)良好，處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，用適宜的消化酶進(jìn)行消化，待細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變并開始脫落時終止消化。將細(xì)胞懸液收集至離心管中，以[根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整]g離心[根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整]分鐘。棄去上清液，用少量預(yù)冷的凍存液輕輕重懸細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

  3.調(diào)整細(xì)胞濃度:根據(jù)細(xì)胞數(shù)量和目標(biāo)細(xì)胞濃度，分次加入適量預(yù)冷凍存液，輕輕混勻，最終將細(xì)胞濃度調(diào)整至1-5×10^6cells/mL。

  4.分裝細(xì)胞:將調(diào)整好濃度的細(xì)胞懸液分裝到已標(biāo)記好的凍存管中，每管0.5-1mL。

  1、適當(dāng)防護(hù)設(shè)備。在進(jìn)行細(xì)胞凍存必須穿戴適當(dāng)個人防護(hù)設(shè)備，避免手套污染，用過的手套與其它污染實(shí)驗(yàn)廢物一起處置。

  2、實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后需滅菌處理。實(shí)驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)臺打開紫外燈照射20-30分鐘；實(shí)驗(yàn)后需要用75%酒精擦拭超凈臺、邊臺、倒置鏡的載物臺。

  3、凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子，均需使用75%酒精徹底擦拭瓶子的外表面。對于已開封或需要進(jìn)行除菌操作的物品，請確保酒精完全揮發(fā)后，再謹(jǐn)慎靠近酒精燈火焰進(jìn)行操作。

  4、凍存前，為了避免細(xì)胞造成損傷，切勿消化時間過長、吹打力度過重、離心轉(zhuǎn)速過大或過長等。

  5、凍存細(xì)胞長期保存在液氮，不建議在-80度長期保存。

  6、細(xì)胞在離心后，盡量的吸干上清液，盡量減少細(xì)胞培養(yǎng)基等殘留物，以免稀釋凍存液。

  7、DMSO溶于培養(yǎng)基會釋放大量的熱容易燙傷細(xì)胞，因此，細(xì)胞凍存液需提前配制，冷卻后再使用。

  上述是紀(jì)寧為大家介紹的細(xì)胞凍存的流程，上述內(nèi)容僅供參考！如有不妥的地方歡迎指正。