細胞傳代培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)的常規(guī)方法之一，當(dāng)細胞隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞分裂時，細胞之間會發(fā)生接觸和接觸，生長速度減慢甚至停止，并且也會因營養(yǎng)不足和代謝產(chǎn)物的積累而不利于細胞生長或中毒。因此，一旦細胞在培養(yǎng)瓶中長滿，就需要稀釋并接種到多個培養(yǎng)瓶中，細胞才能繼續(xù)生長。

　　細胞傳代目的 不僅可以擴大細胞培養(yǎng)數(shù)量，還可以避免細胞因生長停滯甚至衰減而大量死亡的困境，因此，為了使細胞保持在對數(shù)生長期，維持細胞旺盛的分裂能力，此時需要進行細胞傳代。

　　為什么要對細胞進行分裂

　　一旦開始細胞培養(yǎng)，就無法無限期地生長，因為有限空間內(nèi)的細胞數(shù)量不斷增加，營養(yǎng)物質(zhì)消耗，以及毒性代謝物的增加最終導(dǎo)致細胞死亡。傳代培養(yǎng)或分裂細胞會產(chǎn)生比原始培養(yǎng)物細胞密度更低的新培養(yǎng)物。通過去除培養(yǎng)基并將細胞轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基和基質(zhì)中，細胞可以獲得新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)，并去除有毒代謝物，從而可以長期維持培養(yǎng)。最初接種細胞后，生長從滯后期開始，然后進入對數(shù)期，細胞呈指數(shù)增殖，然后進入生長率和死亡率相等的穩(wěn)定期。（圖1）。在死亡階段，細胞因缺乏營養(yǎng)或培養(yǎng)條件不充分而死亡，例如當(dāng)細胞因高或過度匯合而開始爭奪空間時。

　　圖1：細胞的生長曲線：培養(yǎng)細胞的生長曲線由四個階段組成：生長開始前的潛伏期（滯后期）、指數(shù)生長期（對數(shù)期）、細胞數(shù)量快速增長逐漸減緩的穩(wěn)定期和細胞因缺乏營養(yǎng)和生活條件不當(dāng)而死亡的死亡期。對數(shù)期應(yīng)更換培養(yǎng)基，細胞應(yīng)在達到穩(wěn)定期之前進行傳代。

　　為了使細胞保持最佳培養(yǎng)條件并積極生長，必須定期更新生長培養(yǎng)基并進行傳代培養(yǎng)。根據(jù)細胞類型，對數(shù)期可以多次更換培養(yǎng)基。傳代培養(yǎng)細胞的最佳時間是在對數(shù)期和穩(wěn)定期之間，即細胞匯合之前。

　　為什么要檢查細胞？

　　每天檢查細胞培養(yǎng)物（包括在傳代培養(yǎng)前檢查）非常重要，這是監(jiān)測細胞健康狀況、檢查污染和確定何時分裂細胞的一種手段。首先可以用肉眼在宏觀層面檢查培養(yǎng)物是否有真菌污染、渾濁度和培養(yǎng)基中的顆粒以及培養(yǎng)基顏色變化指示的意外pH值變化。但應(yīng)在高放大倍數(shù)下確認沒有細菌污染。此后，應(yīng)使用倒置顯微鏡仔細檢查細胞的一般形態(tài)和生長模式。倒置顯微鏡的光學(xué)元件位于標(biāo)本下方。因為細胞附著在培養(yǎng)皿底部，所以從這個角度可以輕松觀察到它們。觀察時應(yīng)使用總放大倍數(shù)100–200倍和相差，因為大多數(shù)細胞在正常明場照明下難以觀察到。

　　如何對培養(yǎng)細胞進行傳代？

　　準(zhǔn)備細胞進行傳代培養(yǎng)的最常用方法是使用胰蛋白酶等蛋白水解酶破壞細胞間和細胞與底物之間的鍵。胰蛋白酶與乙二胺四乙酸(EDTA)結(jié)合可使細胞脫離生長表面。胰蛋白酶切斷將細胞固定在培養(yǎng)皿上的粘著斑，EDTA充當(dāng)鈣螯合劑。

　　根據(jù)細胞類型或下游實驗，可以使用其他蛋白酶替代胰蛋白酶，例如天然膠原酶或合成解離混合溶液。

　　通過去除鈣，參與細胞間相互作用的鈣粘蛋白被破壞，細胞彼此分離。一旦它們不再與生長表面和周圍細胞結(jié)合，就可以輕松地將它們分離并在新的細胞培養(yǎng)皿中生長。每種細胞類型的細胞培養(yǎng)條件和傳代培養(yǎng)方法各不相同。在整個傳代培養(yǎng)過程中，在無污染的環(huán)境中工作非常重要。在開始時、胰蛋白酶消化過程中、細胞計數(shù)和分裂后對細胞進行檢查是必不可少的。為了獲得一致的結(jié)果和跟蹤實驗，保存良好的記錄和文檔也很重要。

　　好了，今天紀(jì)寧生物為大家介紹細胞傳代，因篇幅有限，細胞傳代步驟單獨一篇文章為大家詳細介紹。細胞傳代對細胞培養(yǎng)是非常關(guān)鍵的步驟，它決定了下游實驗細胞培養(yǎng)的好壞。了解細胞傳代原理，為后續(xù)細胞培養(yǎng)步驟打下基礎(chǔ)。