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紀(jì)寧生物是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品,勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨!下面對ELISA試劑盒常見細(xì)胞樣本處理方法整理,希望對您有所幫助。
細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。 需要注意的是: 因該類樣本干擾因素較多,如細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、ph、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等,所以可能存在檢測不到的情況。
目的物是分泌型,主要在胞外,即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本,細(xì)胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單,取細(xì)胞培養(yǎng)上清,1000 × g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測。
目的物主要存在于胞內(nèi),則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本類型。
細(xì)胞裂解液:
貼壁細(xì)胞需要先用消化,離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);
將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗3次;
物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞,再反復(fù)凍融):
超聲破碎:取適量PBS 重懸細(xì)胞,用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂;
反復(fù)凍融:將待破碎的細(xì)胞在-20℃以下冰凍,室溫融解,反復(fù)3次,使細(xì)胞溶脹破碎;
將標(biāo)本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘,收集上清備用。
注: 一般情況下,物理方法如反復(fù)凍融,勻漿等方法會比化學(xué)方法好,因?yàn)榛瘜W(xué)方法會引入酸或堿,可能會對ELISA實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。利用化學(xué)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測效果,推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。
樣本保存:
處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復(fù)凍融,樣本處理之后可分裝密封保存, 4 度保存應(yīng)小于 1 周,-20 度不應(yīng)超過 1 個月,-80度不應(yīng)超過2個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。
紀(jì)寧生物ELISA試劑盒品種多,質(zhì)量好,靈敏度高,以上是對常見細(xì)胞樣本處理方法整理,希望對您有所幫助。