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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

   ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

  
  ELISA的主要常用類(lèi)型及步驟
  
  1. 間接法測(cè)抗體
  
  間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(二抗)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱(chēng)為間接法。操作步驟如下:
  
  1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
  
  2)加稀釋的樣本,保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過(guò)程中被洗去。
  
  3)加酶標(biāo)抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
  
  4)加底物顯色。
  
  4.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
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