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原代細(xì)胞基本操作過程

  1.取出培養(yǎng)瓶,打開瓶蓋,用吸管吸出舊的培養(yǎng)液。

  
  2.用無 Ca2+ 、Mg 2+ 的平衡鹽溶液輕輕漂洗培養(yǎng)物1 次到 2 次,洗去殘余血清后棄去平衡鹽溶液。
  
  3.在培養(yǎng)皿內(nèi)加入胰蛋白酶溶液, 室溫下消化 5min 到 15min 顯微鏡下觀察細(xì)胞突起縮回近似圓形、細(xì)胞之間的間隙增大時(shí)停止消化。
  
  4.吸管吸去消化液后立即加入含血清培養(yǎng)液或蛋白酶抑制劑,抑制胰蛋白酶的活性,使消化終止。
  
  5.用彎頭吸管吸取培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶皿底壁,使已經(jīng)消化的細(xì)胞脫離瓶皿底壁。
  
  6.低速離心,棄去上清液。
  
  7.用新鮮培養(yǎng)液將細(xì)胞沉淀重新懸浮,計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。
  
  8.根據(jù)傳代目的將細(xì)胞懸浮液接種到一個(gè)或多個(gè)新的培養(yǎng)器皿中。
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