本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素?？贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。
白脂素（Asprosin）是哺乳動(dòng)物（白色脂肪）組織中產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)激素，可刺激肝臟將葡萄糖釋放到血液中。白脂素由基因FBN1編碼，作為原纖維蛋白原的一部分，并通過(guò)異性蛋白水解作用從原纖維蛋白的C末端釋放。在肝臟中，白脂素通過(guò)環(huán)狀單磷酸腺苷（cAMP）依賴性途徑激活葡萄糖的快速釋放。
飯后，肝臟在胰島素的作用下以糖原的形式儲(chǔ)存過(guò)量的葡萄糖。在兩餐之間（或禁食期間），刺激肝臟分解糖原以釋放葡萄糖（糖原分解），并合成新的葡萄糖（糖異生）。然后葡萄糖被釋放到血液中，以維持大腦和其他器官的正常功能。糖原分解和糖異生是由胰高血糖素等激素激活肝細(xì)胞中的環(huán)磷酸腺苷（AMP）通路，該cAMP促進(jìn)代謝酶的激活，導(dǎo)致葡萄糖的產(chǎn)生和釋放。
有研究發(fā)現(xiàn)，表現(xiàn)出胰島素抵抗和肥胖的患者血清中的Asprosin水平升高。接受減肥手術(shù)的肥胖患者手術(shù)后血清中的Asprosin水平下降。在對(duì)動(dòng)物進(jìn)行的藥物性的Asprosin消耗實(shí)驗(yàn)中，初步結(jié)果提出了Asprosin用于治療II型糖尿病和肥胖癥的可能性。例如，Chopra及其同事觀察到，將針對(duì)Asprosin的抗體注射到糖尿病小鼠體內(nèi)時(shí)，血糖和胰島素水平得到了改善。有報(bào)道稱Asprosin能穿過(guò)血腦屏障，調(diào)節(jié)控制饑餓感和飽腹感的下丘腦中的神經(jīng)元，抑制肥胖小鼠中的Asprosin會(huì)減少進(jìn)食并導(dǎo)致體重減輕。
小鼠elisa檢測(cè)試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
QQ：2881498722 
手機(jī)號(hào)碼：15800441226
服務(wù)電話：021-54721350
E-mail：[email protected]
公司地址：上海市金山工業(yè)區(qū)亭衛(wèi)公路6558號(hào)9幢2447-12室