ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡稱。它是在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術 。
?。?）要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
?。?）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
?。?）血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。
（4）冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
?。?）標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。
實驗原理：
包被：抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原抗體反應等免疫活性；
標記：抗原或者抗體可通過共價鍵與酶連接成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點；
顯色：酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或者抗體結合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應，根據(jù)反應的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。
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