一、雙抗夾心法ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體（檢測(cè)抗體）保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。

雙抗原夾心法測(cè)抗體的反應(yīng)模式與測(cè)抗原相似，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。

優(yōu)點(diǎn)：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測(cè)抗體都是檢測(cè)特異性的；適用于復(fù)雜樣品，抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測(cè)；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。

缺點(diǎn)：檢測(cè)物需要擁有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位；不適用于檢測(cè)小分子物質(zhì)。

二、競(jìng)爭(zhēng)法ELISA

原理：競(jìng)爭(zhēng)法ELISA更為復(fù)雜，通常用于檢測(cè)小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競(jìng)爭(zhēng)相同的有限量抗體，當(dāng)樣品中的游離抗原越多，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量。競(jìng)爭(zhēng)法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。