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一、雙抗夾心法ELISA
原理:雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子,但不適用于小分子抗原。將特異性抗體(捕獲抗體)與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品,保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體(檢測(cè)抗體)保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。
雙抗原夾心法測(cè)抗體的反應(yīng)模式與測(cè)抗原相似,用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。
優(yōu)點(diǎn):高特異性,使用的捕獲抗體與檢測(cè)抗體都是檢測(cè)特異性的;適用于復(fù)雜樣品,抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測(cè);靈活性更大,靈敏度更高,可采用直接法也可采用間接法。
缺點(diǎn):檢測(cè)物需要擁有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位;不適用于檢測(cè)小分子物質(zhì)。
二、競(jìng)爭(zhēng)法ELISA
原理:競(jìng)爭(zhēng)法ELISA更為復(fù)雜,通常用于檢測(cè)小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競(jìng)爭(zhēng)相同的有限量抗體,當(dāng)樣品中的游離抗原越多,就可結(jié)合越多的抗體,而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物,只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量。競(jìng)爭(zhēng)法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。